基因工程的相關(guān)技術(shù)可用于病毒檢測(cè),也可用于制備疫苗。利用熒光PCR技術(shù)檢測(cè)是否感染某種RNA病毒時(shí),基本操作流程為:提取病毒的RNA→熒光PCR擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄DNA→熒光檢測(cè)。請(qǐng)回答下列問題:
(1)分離病毒的RNA通常在冰浴條件下進(jìn)行,目的是抑制RNA酶RNA酶的活性,防止病毒的RNA降解。熒光PCR反應(yīng)體系中需要加入的酶和原料是反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶和4種脫氧核苷酸反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶和4種脫氧核苷酸。為保證反應(yīng)體系只擴(kuò)增病毒特異性核酸序列,應(yīng)先根據(jù)病毒的特異性核酸序列設(shè)計(jì)2種引物2種引物。
(2)熒光染料能摻入DNA雙鏈中發(fā)出熒光,在游離狀態(tài)下不發(fā)出熒光。若檢測(cè)到熒光量達(dá)到某個(gè)臨界值,則代表陽性,說明樣本中含有病毒的RNA樣本中含有病毒的RNA。若檢測(cè)出現(xiàn)“假陰性”現(xiàn)象,原因可能是病毒的RNA在提取過程中發(fā)生降解病毒的RNA在提取過程中發(fā)生降解。
(3)某病毒的E蛋白和P蛋白會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。構(gòu)建重組活病毒載體疫苗時(shí),獲取某病毒的E基因和P基因E基因和P基因插入腺病毒的基因組中。通過重組腺病毒感染動(dòng)物可使其獲得免疫力,原因是重組腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)E蛋白和P蛋白,刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體和記憶細(xì)胞重組腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)E蛋白和P蛋白,刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體和記憶細(xì)胞。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】RNA酶;反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶和4種脫氧核苷酸;2種引物;樣本中含有病毒的RNA;病毒的RNA在提取過程中發(fā)生降解;E基因和P基因;重組腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)E蛋白和P蛋白,刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體和記憶細(xì)胞
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:22引用:2難度:0.7
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1.以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù),其中說法正確的是( ?。?/h2>
A.DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最大 B.PCR的兩種引物一般20-30個(gè)核苷酸,過長(zhǎng)易發(fā)生引物內(nèi)部的折疊 C.對(duì)PCR循環(huán)30次之后的DNA分子進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,與標(biāo)樣對(duì)照判斷是否存在目的基因片段 D.瓊脂糖凝膠電泳從陰極加樣,分子量較大的接近于加樣孔 發(fā)布:2024/12/15 16:30:6組卷:5引用:1難度:0.5 -
2.科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體,進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1,SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答:
限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
(4)科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓
(5)過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽,其原理是發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:41引用:3難度:0.6 -
3.下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn),說法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
A.PCR利用了DNA的熱變性原理,通過調(diào)節(jié)溫度來控制 B.PCR的產(chǎn)物一般要通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定 C.凝膠中DNA分子的遷移速率只與DNA分子的大小有關(guān) D.為避免外源DNA等因素的污染,PCR實(shí)驗(yàn)中使用的工具也需要滅菌處理 發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:3引用:1難度:0.6
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