蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用,而且對人體沒有影響.我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥,做了相關研究.
(1)研究者用相同的
限制酶和DNA連接
限制酶和DNA連接
酶處理蛋白A基因和pET質粒,得到重組質粒,再將重組質粒置于經 CaCl2
CaCl2
處理的大腸桿菌細胞懸液中,獲得轉基因大腸桿菌.
(2)檢測發(fā)現,轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低,研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好,因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物(引物B和C中都替換了一個堿基),并按圖2方式依次進行4次PCR擴增,以得到新的蛋白A基因.
①這是一種定點的 基因突變
基因突變
技術.
②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物?請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”,若不選用該引物則劃“×”).
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引物A |
引物B |
引物C |
引物D |
PCR1 |
√ √
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√ √
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× ×
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× ×
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PCR2 |
× ×
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× ×
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√ √
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√ √
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PCR3 |
× ×
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× ×
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× ×
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× ×
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PCR4 |
√ √
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× ×
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× ×
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√ √
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(3)研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒和
含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒(pET質粒)
含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒(pET質粒)
分別導入大腸桿菌,提取培養(yǎng)液中的蛋白質,用
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物,判斷新蛋白A基因表達效率是否提高.為檢測表達產物的生物活性,研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上,培養(yǎng)一段時間后,比較
抑菌圈
抑菌圈
的大小,以確定表達產物的生物活性大?。?br />(4)作為微生物農藥,使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌,其優(yōu)點是
對人、畜、農作物和自然環(huán)境安全;不會造成基因污染;有效成分純度較高
對人、畜、農作物和自然環(huán)境安全;不會造成基因污染;有效成分純度較高
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