蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響．我國科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究．
（1）研究者用相同的

限制酶和DNA連接

限制酶和DNA連接

酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒置于經(jīng)

CaCl₂

CaCl₂

處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中，獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌．
（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），并按圖2方式依次進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以得到新的蛋白A基因．
①這是一種定點(diǎn)的

基因突變

基因突變

技術(shù)．
②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）．

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1	√ √	√ √	× ×	× ×
PCR2	× ×	× ×	√ √	√ √
PCR3	× ×	× ×	× ×	× ×
PCR4	√ √	× ×	× ×	√ √

（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和

含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）

含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）

分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高．為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較

抑菌圈

抑菌圈

的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小．
（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點(diǎn)是

對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高

對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高

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