某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達(dá)N蛋白胞外段，制備相應(yīng)的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。
Ⅰ.N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1所示：
（1）構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒時(shí)，選用氨芐青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，目的是 用于篩選病毒包裝細(xì)胞用于篩選病毒包裝細(xì)胞。用脂質(zhì)體將重組慢病毒質(zhì)粒與輔助質(zhì)粒導(dǎo)入病毒包裝細(xì)胞，質(zhì)粒被包在脂質(zhì)體 雙分子層中雙分子層中（填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”）。
（2）質(zhì)粒在包裝細(xì)胞內(nèi)組裝出由 核酸和蛋白質(zhì)核酸和蛋白質(zhì)組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細(xì)胞進(jìn)而表達(dá)并分離、純化N蛋白胞外段。
Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2所示：
（3）用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進(jìn)行免疫后，取小鼠脾組織用 胰蛋白胰蛋白酶處理，制成細(xì)胞懸液，置于含有混合氣體的 二氧化碳培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
（4）用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，將其接種到96孔板，進(jìn)行 單獨(dú)單獨(dú)培養(yǎng)。用 抗原—抗體抗原—抗體技術(shù)檢測每孔中的抗體，篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng)，收集 細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞培養(yǎng)液，提取單克隆抗體。
（5）利用N蛋白胞外段抗體與藥物結(jié)合，形成 ADC（抗體—藥物偶聯(lián)物）ADC（抗體—藥物偶聯(lián)物），實(shí)現(xiàn)特異性治療。
【考點(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】用于篩選病毒包裝細(xì)胞；雙分子層中；核酸和蛋白質(zhì)；胰蛋白；二氧化碳培養(yǎng)箱；單獨(dú)；抗原—抗體；細(xì)胞培養(yǎng)液；ADC（抗體—藥物偶聯(lián)物）
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：248引用：3難度：0.6
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細(xì)胞表面的信號調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱?？茖W(xué)家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細(xì)胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時(shí)識別癌胚抗原和長春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請分析回答下列問題：
（1）與植物體細(xì)胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細(xì)胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。
（2）對③篩選出的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行和，才能篩選出足夠量的既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是（答出一點(diǎn)）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)到一定時(shí)期的單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞會因?yàn)?、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長春堿相比，將長春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會對健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
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