抗凝血?jiǎng)?/div>。樣品處理中紅細(xì)胞要用
生理鹽水
生理鹽水
洗滌,并采用低速短時(shí)間離心,如此反復(fù)三次,直至
上清液不再呈現(xiàn)黃色
上清液不再呈現(xiàn)黃色
,表明紅細(xì)胞已經(jīng)洗滌干凈。
(3)將洗滌干凈的紅細(xì)胞置于燒杯中,加入蒸餾水和
甲苯
甲苯
使紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白。將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析,透析的目的是除去相對(duì)分子質(zhì)量
小
小
(填“大”或“小”)的蛋白質(zhì)。
(4)該小組通過(guò)粗分離獲得血紅蛋白混合液后,可以用凝膠色譜法進(jìn)一步純化。使用該方法時(shí),先從色譜柱中洗脫出來(lái)的是相對(duì)分子質(zhì)量
大
大
(填“大”或“小”)的蛋白質(zhì)。操作時(shí)要注意色譜柱的裝填不得有氣泡,原因是
相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,而使其所經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng);相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)被排阻在凝膠顆粒外面,在顆粒之間迅速通過(guò)
相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,而使其所經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng);相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)被排阻在凝膠顆粒外面,在顆粒之間迅速通過(guò)
。
(5)最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。加入SDS可以使蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率完全取決于
分子大小
分子大小
。