11.科學(xué)家將tetX基因(四環(huán)素降解酶基因)和pET28a質(zhì)粒結(jié)合,導(dǎo)入大腸桿菌,通過發(fā)酵可生產(chǎn)四環(huán)素降解酶。某DNA分子上tetX基因片段附近和pET28a質(zhì)粒上的限制酶酶切位點(diǎn)如圖1所示,其中BamHⅠ的識(shí)別序列為5'G↓GATCC3',NdeⅠ的識(shí)別序列是5'CA↓TATG3'。圖2表示利用PCR技術(shù)從某DNA中獲取tetX基因的一個(gè)環(huán)節(jié)?;卮鹣铝袉栴}:
(1)基因轉(zhuǎn)錄時(shí),3'端在啟動(dòng)子端的單鏈充當(dāng)模板,為保證tetX基因能用β鏈充當(dāng)轉(zhuǎn)錄模板,設(shè)計(jì)引物時(shí)最好在圖2所示引物Ⅰ的5端方框位置添加3'
5'序列,經(jīng)PCR擴(kuò)增后,獲得足量目的基因片段,再用
酶切割質(zhì)粒和tetX基因兩端,從而構(gòu)建重組質(zhì)粒。
(2)某同學(xué)用PCR儀擴(kuò)增tetX基因時(shí),加入(2
n-1)對(duì)引物,引物Ⅰ(3'CGCGAA?AATGC5')和引物Ⅱ(5'CACTC?GCGCTT3')各半,其他條件符合要求,發(fā)現(xiàn)最終產(chǎn)物中tetX基因數(shù)量遠(yuǎn)少于2
n個(gè),試從所用引物Ⅰ和引物Ⅱ序列的角度,分析原因
,這種情況的存在,也是PCR產(chǎn)物需要利用
進(jìn)行鑒定的原因之一。
(3)tetX基因隨上述重組質(zhì)粒進(jìn)入大腸桿菌中穩(wěn)定存在并表達(dá)的過程稱為
。充當(dāng)受體菌的大腸桿菌應(yīng)
(“抗”或“不抗”)卡那霉素,在含卡那霉素的培養(yǎng)基上能形成菌落的受體菌中未必含tetX基因,原因是
。