11.甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)。為了改善黃瓜的口感,研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導入黃瓜細胞,得到了轉(zhuǎn)基因植株。如圖1、圖2分別為甜蛋白基因編碼鏈(僅示部分堿基)和Ti質(zhì)粒的示意圖,其中①~⑤表示不同位點?;卮鹣铝袉栴}:
(1)獲取甜蛋白基因時,通常是在細胞內(nèi)提取mRNA,一般先通過
得到DNA,再經(jīng)
獲取大量甜蛋白基因,酶切后再連接到Ti質(zhì)粒上。如表為不同限制酶的作用位點,在構(gòu)建甜蛋白基因表達載體時,應選用的限制酶是
。
限制酶 |
BamHⅠ |
PstⅠ |
XhoⅠ |
XbaⅠ |
識別序列和切割位點 |
5'G↓GATCC3' |
5'C↓TGCAG3' |
5'C↓TCGAG3' |
5'T↓CTAGA3' |
(2)研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導入黃瓜細胞,依據(jù)農(nóng)桿菌的侵染特點,甜蛋白基因應插入到Ti質(zhì)粒的
上,經(jīng)過轉(zhuǎn)化作用,進入黃瓜細胞,并將其插入到
,從而使其穩(wěn)定表達。對載體Ti質(zhì)粒進行改造時,需要插入多個限制酶單一切點,應選擇在圖2中的位點
(填序號)處插入。
(3)轉(zhuǎn)入甜蛋白基因后的黃瓜細胞,轉(zhuǎn)化后應在培養(yǎng)基中添加
(填“潮霉素”或“卡那霉素”),篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織。若要獲得產(chǎn)甜蛋白能力更強的基因,可以對甜蛋白基因進行改造,最終得到更多的甜蛋白,該過程可以通過蛋白質(zhì)工程完成,基本思路為
(用文字和箭頭表示)。