24.科研人員克隆了豬白細胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達載體,進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如下,SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復制原點的距離??赡苡玫降南拗泼缸R別序列和切割位點如下表所示。
限制酶 |
BclⅠ |
NotⅠ |
XbaⅠ |
Sau3AⅠ |
識別序列及切割位點 |
T↓GATCA |
GC↓GGCCGC |
T↓CTAGA |
↓GATC |
(1)過程①中,PCR擴增SLA-2的原理是
,下列4種引物中應(yīng)選擇的是
。
引物a:5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b:5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c:5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d:5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
(2)過程②將重組質(zhì)粒導入大腸桿菌的目的是
,該過程需要用
處理大腸桿菌,使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有
(抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
(3)若用限制酶Sau3AⅠ和XbaⅠ完全切割質(zhì)粒B和質(zhì)粒C后電泳,請在圖3中畫出預測的電泳結(jié)果
。
(4)科研中常用嘌呤霉素對真核細胞進行篩選,嘌呤霉素對細胞的毒性實驗結(jié)果如圖,根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為
,原因是
。
(5)篩選產(chǎn)SLA-2抗原肽的豬腎上皮細胞的方法是
。