35.棉花種植過程中常因棉鈴蟲啃食葉片而減產。蘇云金芽孢桿菌能產生具有殺蟲能力的Bt毒蛋白??蒲腥藛T將Bt毒蛋白基因作為目的基因導入普通棉株細胞內,培育出了能抗棉鈴蟲的轉基因抗蟲棉。如圖為制備抗蟲棉的基本流程,①~⑤表示相關的操作。請回答下列問題:
(1)步驟①中,利用PCR技術擴增Bt毒蛋白基因時,需要根據(jù)Bt毒蛋白基因兩端的部分核苷酸序列設計
。
(2)步驟②構建基因表達載體時需要用到ECoRⅠ和BamHⅠ兩種
酶對目的基因和質粒進行切割,酶切后形成的目的基因兩端的黏性末端
(填“相同”或“不相同”),以防止自身環(huán)化。切割后的產物還需要用
酶進行連接。
(3)步驟③中需先用
處理農桿菌以便將基因表達載體導入其中。
(4)步驟④中,可通過
技術檢測愈傷組織細胞中是否含有Bt毒蛋白,若未檢測出Bt毒蛋白,則可能的原因是
。
(5)分別用普通棉花植株和轉基因棉花植株的葉片飼喂棉鈴蟲,若出現(xiàn)
結果,說明抗蟲棉對棉鈴蟲表現(xiàn)出一定的抗性。