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甲型血友?。℉A）是血液中凝血因子Ⅷ（FⅧ）遺傳性缺陷導(dǎo)致的遺傳性出血性疾病，我國科學(xué)家利用乳腺特異性表達啟動子（α-LA）使重組人凝血因子Ⅷ在家兔中特異且高效的表達。據(jù)圖回答下列問題：

（1）耐高溫的DNA聚合酶進行DNA復(fù)制時會沿著子鏈的5'→3'方向延伸。利用PCR技術(shù)對乳腺特異性表達啟動子（α-LA）進行擴增時，應(yīng)該選用圖中的引物
2和3
2和3
。四次循環(huán)后產(chǎn)生的DNA分子中，只含有一個引物的DNA分子占DNA分子總數(shù)的
1
8
1
8
。
（2）構(gòu)建基因表達載體時，常常會使用兩種不同的限制酶處理目的基因和運載體，原因是若使用同一種限制酶，經(jīng)
DNA連接
DNA連接
酶連接以后，除了會產(chǎn)生基因表達載體以外，還會有一些特殊的DNA，如
目的基因與目的基因相連、運載體和運載體相連、運載體和目的基因自身環(huán)化
目的基因與目的基因相連、運載體和運載體相連、運載體和目的基因自身環(huán)化
（至少答兩種）。
（3）將基因表達載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是
顯微注射技術(shù)
顯微注射技術(shù)
。將重組細胞培養(yǎng)成胚胎的過程需要培養(yǎng)液，該營養(yǎng)液成分一般比較復(fù)雜，除了需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸和血清外，還需要添加
有機鹽和無機鹽
有機鹽和無機鹽
。
（4）將家兔早期胚胎移植到代孕母兔中，因為
受體對移植到子宮的外來胚胎幾乎不發(fā)生排異反應(yīng)
受體對移植到子宮的外來胚胎幾乎不發(fā)生排異反應(yīng)
，這樣胚胎才能在受體體內(nèi)存活。為鑒定實驗兔的基因組中是否含有人凝血因子Ⅷ基因，一般采用
DNA分子雜交技術(shù)
DNA分子雜交技術(shù)
方法。

【考點】基因工程的操作過程綜合．

【答案】2和3；

；DNA連接；目的基因與目的基因相連、運載體和運載體相連、運載體和目的基因自身環(huán)化；顯微注射技術(shù)；有機鹽和無機鹽；受體對移植到子宮的外來胚胎幾乎不發(fā)生排異反應(yīng)；DNA分子雜交技術(shù)

【解答】

【點評】

聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：19引用：1難度：0.6

相似題

1．RNA沉默是雙鏈RNA被特異性的核酸酶降解，產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA），這些siRNA與同源的靶RNA互補結(jié)合，特異降解靶RNA，從而抑制基因表達。棉蚜是棉花的主要害蟲，嚴(yán)重危害棉花的生產(chǎn)。E基因是棉蚜生長發(fā)育的重要基因，為了控制棉蚜對棉花的危害，科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在棉花中表達棉蚜E基因的雙鏈RNA（dsRNA），特異性抑制棉蚜內(nèi)源E基因的表達。如圖是主要流程，請回答：

限制酶識別序列和切點

EcoRⅠ G↓AATTC

KpnⅠ G↓GTACC

BamHⅠ G↓GATCC

XbaⅠ T↓CTAGA

（1）根據(jù)PCR1反應(yīng)體系中加入的引物1和2推測PCR2中加入的引物為

。
A．5'-AAATCTAGAAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
B．5'-AAATCTAGACTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
C．5'-AAAGGATCCAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
D．5'-AAAGGATCCCTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
（2）從理論上推測，PCR1第五輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物1的DNA片段所占的比例為

。圖中正義序列和反義序列中堿基排列順序

（填“大多數(shù)相同”或“大多數(shù)不同”或“相同”或“不同”）。過程①需要的工具酶除限制酶外還需要

。
（3）過程②將表達載體轉(zhuǎn)化到經(jīng)

處理的農(nóng)桿菌菌株后，為了確定重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)化可以通過

驗證。
（4）過程④愈傷組織形成棉花植株的過程稱為

。轉(zhuǎn)基因棉花再生植株移栽到溫室后，葉片涂抹

檢測抗性，并提取DNA進行PCR分析。
（5）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉(zhuǎn)化的4株棉花植株葉片的基因組DNA，用HindⅢ完全消化，消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結(jié)果如圖2所示（圖中數(shù)字2～5代表轉(zhuǎn)化成功的植株，數(shù)字1代表對照組）。下列有關(guān)分析正確的有

。
①對照組可以用非轉(zhuǎn)基因棉花的基因組DNA進行實驗
②數(shù)字3所代表的植株中目的基因插入染色中的兩個不同位置
③選擇HindⅢ進行消化的原因是基因組DNA中一般只有1～2切點
④相同位置上雜交帶對應(yīng)DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（6）科研人員進一步鑒定上述4號泳道對應(yīng)的植株，確定獲得一株轉(zhuǎn)基因抗性植株CZ4，CZ4連續(xù)自交兩代，則F₂中抗性植株占比為

。

發(fā)布：2024/10/17 17:0:4組卷：11引用：1難度：0.4

解析

2．某研究小組利用水稻細胞培育能產(chǎn)生HPV（人乳頭瘤病毒）-L1蛋白的水稻胚乳細胞生物反應(yīng)器，為獲得HPV-L1蛋白提供一種新的高效、低廉的途徑，用于制備HPV疫苗。其基本流程包括表達載體的構(gòu)建、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化、水稻細胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)基因植株的篩選等步驟，最終獲得能產(chǎn)生含HPV-L1蛋白胚乳細胞的轉(zhuǎn)基因水稻?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR是獲取HPV-L1基因的一種方法，PCR反應(yīng)體系設(shè)計的兩種引物，在引物間和引物內(nèi)的堿基都不能互補，其原因是

。
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化：科研人員構(gòu)建了如圖所示的表達載體，將其與經(jīng)過Ca²⁺處理后的農(nóng)桿菌細胞混合，隨后將菌液涂布在含

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取菌落進行PCR鑒定后再擴大培養(yǎng)待用。
（3）水稻細胞轉(zhuǎn)化：取水稻離體組織置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基啟動子潮霉素啟動子抗性基因中發(fā)生

過程形成愈傷組織。挑取生長良好的愈傷組織加入到（2）中得到的菌液中共培養(yǎng)，完成轉(zhuǎn)化過程。
（4）轉(zhuǎn)基因水稻的篩選：將轉(zhuǎn)化處理后的水稻愈傷組織放在含

（抗生素）的培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，并誘導(dǎo)出轉(zhuǎn)基因水稻。
（5）水稻胚乳生物反應(yīng)器具有提取和處理產(chǎn)物簡易、生產(chǎn)成本低和生物安全性高等特點，從而被廣泛應(yīng)用。請在分子水平上提出兩個提高水稻胚乳生物反應(yīng)器產(chǎn)物產(chǎn)量的思路：

。
發(fā)布：2024/10/25 0:0:1組卷：5引用：1難度：0.5
解析
3．α-淀粉酶被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)過程中。為獲得催化活性高的α-淀粉酶，科研人員利用細菌進行改造。
（1）α-淀粉酶能將

水解為低聚糖和單糖，其催化活性高低往往取決于該酶活性中心的

結(jié)構(gòu)。
（2）科研人員提取枯草芽孢桿菌的表達載體，插入大腸桿菌復(fù)制原點以及氨芐青霉素抗性基因，構(gòu)建如圖所示重組穿梭載體。
①根據(jù)α-淀粉酶活性中心的氨基酸序列，通過

工程得到α-淀粉酶突變基因。
②構(gòu)建圖中所示重組穿梭載體需要的酶是

。插入大腸桿菌復(fù)制原點的目的是

。
③將含有α-淀粉酶突變基因的重組穿梭載體導(dǎo)入

的大腸桿菌細胞中。將大腸桿菌菌液涂布于含

的選擇培養(yǎng)基上，待長出菌落后，用PCR方法檢驗成功轉(zhuǎn)化的細胞。
（3）培養(yǎng)轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌并從中提取重組穿梭載體，導(dǎo)入枯草芽孢桿菌。將培養(yǎng)得到的枯草桿菌菌液涂布于含淀粉的培養(yǎng)基上，一段時間后選擇

的菌落，從中可篩選得到催化活性較高的α-淀粉酶。
（4）請舉一例說明本實驗獲得的催化活性高的α-淀粉酶在生產(chǎn)中的應(yīng)用價值：

。
發(fā)布：2024/10/25 17:0:1組卷：13引用：1難度：0.6
解析

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限制酶	識別序列和切點
EcoRⅠ	G↓AATTC
KpnⅠ	G↓GTACC
BamHⅠ	G↓GATCC
XbaⅠ	T↓CTAGA