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第一代DNA測序技術是由桑格等科學家發(fā)明的,又稱為鏈終止法測序,科學家用該技術測定了噬菌體X174的基因組序列,操作流程如圖所示,回答下列問題:
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(1)將碎片化的DNA片段連接到質粒載體中,需要用到
限制性內切酶
限制性內切酶
、
DNA連接酶
DNA連接酶
等工具酶。
(2)為保證放射自顯影觀察條帶,應選用
32P
32P
(填“18O”或“32P”)標記ddNTP。
(3)在凝膠電泳中DNA分子的遷移速率與DNA分子的
DNA分子的大小和構象
DNA分子的大小和構象
、
凝膠的濃度
凝膠的濃度
有關。
(4)ddNTP法循環(huán)測序中,用到PCR技術,該技術的原理是
DNA的半保留復制
DNA的半保留復制
,加入ddNTP會使PCR反應終止的原因可能是
連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′,5′-磷酸二酯鍵,導致ddNTP一旦連接到子鏈末端,子鏈便停止延伸
連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′,5′-磷酸二酯鍵,導致ddNTP一旦連接到子鏈末端,子鏈便停止延伸

【答案】限制性內切酶;DNA連接酶;32P;DNA分子的大小和構象;凝膠的濃度;DNA的半保留復制;連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′,5′-磷酸二酯鍵,導致ddNTP一旦連接到子鏈末端,子鏈便停止延伸
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有,未經書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:6引用:2難度:0.7
相似題
  • 1.PCR是利用體內DNA復制的原理,進行生物體外復制特定 DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題:菁優(yōu)網
    (1)PCR反應的基本步驟是變性、
     
    、
     
    。
    (2)科學家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化
     
    方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體 DNA的半保留復制過程,有一條子鏈是先合成短的DNA片段(稱為岡崎片段),再形成較長的分子,可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、
     
     
    。在PCR過程中無岡崎片段形成,原因是細胞內染色體 DNA的復制過程特點是
     
    ,PCR過程的特點是
     
    。
    (3)雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)與脫氧核苷三磷酸(dNTP)的結構如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后,子鏈的延伸立即終止?,F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段,通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端(3'為堿基C)不同長度的子鏈DNA片段,將以上子鏈 DNA片段進行電泳分離可得到
     
    種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實驗順利進行,在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應的緩沖液等物質外,還需要加入下列哪組原料
     
    。
    A.dGTP,dATP,dTTP
    B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
    C.dGTP,dATP,dTTP,dCTP
    D.ddGTP,ddATP,ddTTP,ddCTP
    (4)如圖3為形成單鏈DNA后,再進行PCR擴增示意圖。
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    催化①過程的酶是
     
    ;核酸酶H的作用是
     
    。如果某RNA單鏈中一共有80個堿基,其中C有15個,A與U之和占該鏈堿基含量的40%,經過以上若干過程后共獲得8個雙鏈 DNA,此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為
     
    (以上過程不考慮引物)。

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:19引用:1難度:0.7
  • 2.PCR是利用體內DNA復制的原理,進行生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題:
    菁優(yōu)網
    (1)PCR反應的基本步驟是變性、復性、
     

    (2)雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)與脫氧核苷三磷酸(dNTP)的結構如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后,子鏈的延伸立即終止。現(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段,通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端(3'為堿基C)不同長度的子鏈DNA片段,將以上子鏈DNA片段進行電泳分離可得到
     
    種不同長度的子鏈DNA片段。為使實驗順利進行,在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應的緩沖液等物質外,還需要加入下列哪組原料
     
    。
    A.dGTP、dATP、dTTP
    B.dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
    C.dGTP、dATP、dTTP、dCTP
    D.ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
    (3)科學家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化
     
    方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體DNA的復制過程,有一條子鏈是先合成短的DNA片段(稱為岡崎片段),再形成較長的分子,可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶
     
    、
     
    。在PCR過程中無岡崎片段形成,原因是細胞內染色體DNA的復制過程特點是
     
    ,PCR過程的特點是
     
    。

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:12引用:1難度:0.7
  • 3.Sanger法DNA測序技術的核心原理:由于雙脫氧核苷酸(ddNTP)的2'和3'都不含羥基,其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵,因此可以中斷DNA分子合成反應。在四個含有4種脫氧核苷酸(dNTP)的DNA體外合成反應體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP(分別為:ddATP,ddCTP,ddGTP和ddTTP),在PCR過程中復制隨機終止,產生四組不同長度的一系列終止處帶有標記的DNA片段。然后在變性凝膠(加入尿素等堿性物質)上進行電泳和放射自顯影后,可以根據電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列,具體過程見圖。
    注:ddA是ddATP的縮寫形式。
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    (1)如圖1中Ⅰ過程橫線①中應該加入的物質是
     
    ,dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是
     
    ,為什么該過程中需要添加引物?
    (2)材料中提到“在變性凝膠上進行電泳……”,請解釋“變性”
     
    ,為什么要變性處理?
     

    (3)如果電泳結果如圖2所示,請寫出待測DNA分子的序列
     
    。
    (4)某同學要通過PCR技術獲得被32P標記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段,在反應管中已經有模板、引物、酶和相應緩沖液等等,還需加入哪些原料
     

    發(fā)布:2024/10/26 17:0:2組卷:16引用:1難度:0.7
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