三氯生是一種廣譜抑菌物質，可用于基因工程中篩選含目的基因的受體菌。某科研團隊通過先篩選出一種對三氯生抗性較強的重組質粒（如圖1），再將可以受溫度調控的基因插入該質粒上，構建了溫度調控表達質粒。請回答下列問題：
（1）利用從細菌中提取的DNA通過PCR技術獲取fabVA基因（或fabVB基因）時，至少需經(jīng)過 44次擴增可獲得8個雙鏈等長的目的基因。實驗操作時，微量離心管中需加入的物質有：模板、引物、原料、緩沖液、Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）緩沖液、Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）。圖2為PCR產(chǎn)物的電泳結果，操作較理想的泳道有 44條。
（2）圖1中，步驟Ⅰ需要的工具酶是 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶；步驟Ⅱ常用的方法是用Ca2+處理使細菌成為 感受態(tài)感受態(tài)；為達到步驟Ⅲ預期的篩選目的，所用物質X最可能為 三氯生三氯生。
（3）為獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質粒，將含有不同質粒的大腸桿菌分別接種到相應培養(yǎng)基中。培養(yǎng)一段時間后，結果如圖3，則適宜選作構建溫度調控表達質粒的是 （重組質粒）pEA（重組質粒）pEA。
（4）科研工作者對上述選出的質粒進行改造，獲得了圖4所示質粒。其中S1和S2是啟動子，P1和P2是終止子。H基因在高溫下會抑制S1，L基因在低溫下會抑制S2。
①如果將lacZ基因和GFP（綠色熒光蛋白）基因插入圖4質粒中，且使得低溫下只表達GFP基因，高溫下只表達lacZ基因，則lacZ基因插在 啟動子S2和終止子P2（S2和P2）啟動子S2和終止子P2（S2和P2）之間，而GFP基因的插入位置及注意點是 插在啟動子S1和終止子P1（插在S1和P1）之間，但不破壞H基因和L基因插在啟動子S1和終止子P1（插在S1和P1）之間，但不破壞H基因和L基因。
②若以大腸桿菌為受體細胞，篩選上述①中插入GFP基因成功的受體細胞的依據(jù)是：大腸桿菌能在含 三氯生三氯生的培養(yǎng)基中生長，且 低溫下有綠色熒光，高溫下無綠色熒光低溫下有綠色熒光，高溫下無綠色熒光。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】4；緩沖液、Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶）；4；限制酶和DNA連接酶；感受態(tài)；三氯生；（重組質粒）pEA；啟動子S2和終止子P2（S2和P2）；插在啟動子S1和終止子P1（插在S1和P1）之間，但不破壞H基因和L基因；三氯生；低溫下有綠色熒光，高溫下無綠色熒光
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：14引用：1難度：0.6
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
相關試卷