基因編輯是一種新興的比較精確的能對生物體基因組特定目標基因進行修飾的一種基因工程技術(shù)或過程。CRISPR/Cas9系統(tǒng)可對基因組進行定點編輯，其工作原理如圖1所示。人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值，只能從血漿中制備，以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑如圖2所示。

（1）據(jù)圖1可知，在sgRNA1和sgRNA2的引導(dǎo)下，Cas9使基因中的

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵斷裂，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。但該技術(shù)有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”，實驗發(fā)現(xiàn)sgRNA的序列長短影響成功率，越短脫靶率越

高

高

（填“高或“低”）。
（2）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取

總RNA（mRNA）

總RNA（mRNA）

合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用

PCR

PCR

技術(shù)擴增HSA基因（序列為5'CTTCGAAATTC-……-TCTCCCGATCGG3'），根據(jù)其兩端序列，則需要選擇的一對引物序列是

A

A

（填字母）。
A．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
B．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-TCTCCCGATCGG-3'
C．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-AGAGGGCTAGCC-3
D．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
（3）圖甲為獲取的含有目的基因（HSA基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點：圖乙是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖；圖丙是Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖。若用BamHI切割圖甲所示的DNA片段，獲得目的基因，則需選用

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

切割圖丙所示質(zhì)粒，以便構(gòu)建基因表達載體。上述方案存在一定缺陷，故切割圖甲所示DNA片段的最佳方案是選用

EcoRⅠ和BamHⅠ

EcoRⅠ和BamHⅠ

酶。用上述最佳方案構(gòu)建基因表達載體，所得重組質(zhì)粒

不一定能

不一定能

（選填“能”、“不能”或“不一定能”）被BamHⅢ切割。
（4）啟動子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細胞內(nèi)特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是

B

B

（填字母）。
A．人血細胞啟動子
B．水稻胚乳細胞啟動子
C．大腸桿菌啟動子
D．農(nóng)桿菌啟動子
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認rHSA與

HSA

HSA

的生物學(xué)功能一致。