八氫番茄紅素合酶（其基因用psy表示）和胡蘿卜脫飽和酶（其基因用crl表示）共同參與β-胡蘿卜素的合成?？茖W(xué)家將psy和crtl基因與pC1300dT載體結(jié)合后轉(zhuǎn)入水稻，使水稻胚乳中富含β-胡蘿卜素。pC1300dT載體含有2個(gè)T-DNA區(qū)，潮霉素抗性基因（hpt）在一個(gè)T-DNA區(qū)，目的基因在另一個(gè)T-DNA區(qū)。當(dāng)雙T區(qū)載體侵染植物時(shí)，2個(gè)T-DNA區(qū)獨(dú)立轉(zhuǎn)移。請(qǐng)根據(jù)以上信息回答下列問(wèn)題。
（1）表達(dá)載體pC1300dT-psy/crtl的構(gòu)建
psy和crtl基因均可在胚乳特異性谷蛋白啟動(dòng)子（Glup）的驅(qū)動(dòng)下表達(dá)，并在終止子（nos）作用下終止轉(zhuǎn)錄過(guò)程。研究人員利用

HindⅢ和SalⅠ

HindⅢ和SalⅠ

雙酶切表達(dá)載體pC1300dT和psy基因，回收目標(biāo)基因和載體片段，連接形成中間載體pC1300dT-psy。利用

EcoRI和KpnI

EcoRI和KpnI

雙酶切

pC1300dT-psy

pC1300dT-psy

載體和crtl基因。最后連接獲得表達(dá)載體pC1300dT-psy crtl（圖1）。

（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，因此Glup要能夠在

水稻胚乳

水稻胚乳

細(xì)胞內(nèi)特異性表達(dá)。
（3）若想檢測(cè)目的基因是否已整合到水稻細(xì)胞染色體DNA上，可用PCR技術(shù)分別對(duì)psy/crtl 基因進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，首先需要根據(jù)

psy和crtl 基因的脫氧核苷酸序列

psy和crtl 基因的脫氧核苷酸序列

分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，某研究人員設(shè)計(jì)引物時(shí)出錯(cuò)，導(dǎo)致圖2中的②號(hào)引物不可使用，原因是

引物自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效

引物自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效

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（4）通過(guò)PCR技術(shù)在水稻細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到psy/crtl基因，還不能確認(rèn)轉(zhuǎn)基因水稻培育成功，為什么？

還需進(jìn)行β-胡蘿卜素含量檢測(cè)（個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定）

還需進(jìn)行β-胡蘿卜素含量檢測(cè)（個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定）

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