某一質(zhì)粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人給此質(zhì)粒載體加上基因表達所需的結(jié)構(gòu),再用BamHⅠ酶切后,與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應(yīng),用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌,結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?;卮鹣铝袉栴}:
(1)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選,在上述四種大腸桿菌細胞中,未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的,其原因是二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長;并且含有質(zhì)粒載體含有質(zhì)粒載體和含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒)的細胞也是不能區(qū)分的,其原因是二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長。
在上述篩選的基礎(chǔ)上,若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有四環(huán)素四環(huán)素的固體培養(yǎng)基。
(2)篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌進行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)只有部分大腸桿菌能表達基因產(chǎn)物,不能表達的原因是目的基因與質(zhì)粒反向連接目的基因與質(zhì)粒反向連接。
(3)基因工程中,某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體,其DNA復(fù)制所需的原料來自于受體細胞受體細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均不生長;含有質(zhì)粒載體;含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒(或答含有重組質(zhì)粒);二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長;四環(huán)素;目的基因與質(zhì)粒反向連接;受體細胞
【解答】
【點評】
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