某研究小組從土壤中分離獲得能分解纖維素的細菌（A 菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHⅡ，長度為1.4kbp）并進行PCR擴增，然后與高效表達載體pUT質(zhì)粒（長度約為11.7kbp）連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強的工程菌（B菌）。
（1）采集十樣時，可以選擇樹林中多年落葉形成的腐殖土，原因是腐殖土中富含纖維素腐殖土中富含纖維素。采集到的樣品加無菌水稀釋后不需要不需要（填“需要”或“不需要”）進行滅菌處理。
（2）CBHⅡ基因兩端需添加如表的相關(guān)酶切位點才能與圖1所示的pUT質(zhì)粒連接，因此擴增CBHⅡ基因時需在兩種引物上分別添加AGATCTAGATCT序列和GGTAACCGGTAACC序列。
| 限制酶 | 識別序列及酶切位點 |
| BglⅡ | A↓GATCT |
| BstEⅡ | G↓GTAACC |
| SacⅠ | G↓AGCTC |
| MspⅠ | C↓CGG |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
抗生素N
抗生素N
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后提取3個不同菌落的質(zhì)粒分別進行雙酶切驗證，將酶切片段和CBHⅡ基因分別進行電泳，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此分析，菌落2、3
2、3
中成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。（4）為檢測B菌的纖維素分解能力，將含有20%的纖維素的培養(yǎng)基分為三組，一組接種B菌，一組不做處理，一組接種
A菌
A菌
，在相同條件下培養(yǎng)一段時間，測培養(yǎng)基中纖維素含量，結(jié)果如圖3所示，說明B菌分解纖維素的能力最強
B菌分解纖維素的能力最強
。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】腐殖土中富含纖維素；不需要；AGATCT；GGTAACC；抗生素N；2、3；A菌；B菌分解纖維素的能力最強
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
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