大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉染大麗輪枝菌，培育出表達綠色熒光蛋白的轉基因菌株，主要過程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應基因轉錄模板鏈）。分析回答：
（1）過程①中，PCR擴增sGFP的原理是 DNA分子復制DNA分子復制，該過程除需要根據(jù) sGFP兩端的堿基序列sGFP兩端的堿基序列設計特異性引物序列外，為保證sCFP正確插入到質粒中，還需要在引物的 5ˊ端添加限制酶識別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5ˊ→3ˊ）為 AGCTAGCT。
（2）過程①中，除了要添加模板、引物、原料外，還需添加 TaqTaq酶。若1個sGFP片段連續(xù)擴增4次，則會形成 88個兩條鏈等長的sGFP片段，消耗 77個引物1。
（3）過程②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。研究中將 sGFP 插入到構巢曲霉啟動子和終止子之間的目的是 保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達。
（4）將重組質粒導入農(nóng)桿菌時，需要用 Ca2+（ CaCl2）Ca2+（ CaCl2）處理農(nóng)桿菌，使其轉化為感受態(tài)細胞。
（5）過程③中需要配制細菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到 80℃左右后，再加入用潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是 潮霉素在高溫滅菌時結構會被破壞潮霉素在高溫滅菌時結構會被破壞。
（6）選擇過程③篩選培養(yǎng)得到的不同農(nóng)桿菌菌落，分別提取細菌質粒DNA，并用BamHI和 HindIII完全酶切可以得到 33種長度不同的DNA片段。
（7）將導入重組質粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細胞懸液中，在適宜條件完成轉 染后利用濾膜過濾得到孢子細胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA分子復制；sGFP兩端的堿基序列；AGCT；Taq；8；7；DNA連接酶；保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達；Ca2+（ CaCl2）；潮霉素在高溫滅菌時結構會被破壞；3；大麗輪枝菌細胞中綠色熒光的強度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：9引用：1難度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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