生物工程與微生物
基因工程賦予生物新的遺傳特性，如利用大腸桿菌實(shí)現(xiàn)人胰島素大規(guī)模生產(chǎn)。圖1為2種限制酶識(shí)別序列和切割點(diǎn)，圖2為目的基因與pBR322質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒的2種情況，圖3為抗藥性篩選流程。（注：BamHⅠ、PstⅠ、MboⅠ為限制酶，ori為復(fù)制起點(diǎn)，Amp為氨芐青霉素抗性基因，Tet為四環(huán)素抗性基因。上標(biāo)“r”代表抗性；“s”代表敏感）。

（1）獲取人的胰島素基因（目的基因）通常有兩種方法，現(xiàn)已得到人胰島素mRNA分子片段序列，可通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程去獲得胰島素基因。
（2）大腸桿菌pBR322質(zhì)粒中含有氨芐青霉素抗性基因（Amp）和四環(huán)素抗性基因（Tet），這些可供篩選使用的功能性基因稱為

標(biāo)記基因

標(biāo)記基因

。
（3）據(jù)圖1、2中的信息，若人胰島素目的基因與質(zhì)粒分別使用MboI和BamHⅠ不同的限制酶切開，插在質(zhì)粒pBR322的BamHⅠ位點(diǎn)處，在形成重組質(zhì)粒之后，如何重新“卸下”目的基因？為什么

可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因?yàn)锽amHI限制酶的識(shí)別序列消失了

可用MboI限制酶“卸下”目的基因，因?yàn)锽amHI限制酶的識(shí)別序列消失了

。
（4）抗藥性篩選法實(shí)施的前提條件是載體DNA攜帶抗生素的抗性基因。如果采用圖3抗藥性篩選流程，則可篩選出的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌的表現(xiàn)型是

B

B

。
A．僅Amp^sTet^r
B．僅Amp^rTet^s
C．Amp^sTet^r和Amp^rTet^s
D．Amp^sTet^r或Amp^rTet^s
（5）除抗藥性篩選法外，顯色篩選也是常用的方法。很多大腸桿菌的質(zhì)粒上含有l(wèi)acZ′標(biāo)記基因，其表達(dá)的酶蛋白可將一種無色的化合物（X-gal）水解成藍(lán)色產(chǎn)物。若重組DNA技術(shù)常用的大腸桿菌質(zhì)粒pUC18同時(shí)攜帶Amp^r和LacZ′兩個(gè)標(biāo)記基因，據(jù)圖4分析，若想篩選出重組質(zhì)粒，配制的固體培養(yǎng)基上，需含有

Amp和X-gal

Amp和X-gal

，經(jīng)轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增、涂布，圖4中含重組質(zhì)粒的是

白色

白色

（白色/藍(lán)色）菌落。
（6）抗藥性篩選法、顯色篩選同時(shí)使用與單用抗藥性篩選法兩者有何區(qū)別？你認(rèn)為哪種方法更具有優(yōu)勢？為什么？