新冠病毒是一種帶包膜的RNA病毒,膜表面的刺突蛋白(S蛋白)與宿主細(xì)胞膜表面的受體ACE2結(jié)合,介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),RBD是S蛋白中負(fù)責(zé)和受體ACE2結(jié)合的關(guān)鍵蛋白?;谝陨涎芯浚晨蒲袌F(tuán)隊研發(fā)了一種重組新冠病毒疫苗,制備過程如圖1所示。請回答下列問題:?
(1)為獲得更多的目的基因,可利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增時應(yīng)選擇
引物Ⅱ和引物Ⅲ
引物Ⅱ和引物Ⅲ
(填圖2中的序號)作引物,引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從3'端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從3'端開始連接脫氧核苷酸
,獲得的RBD蛋白基因不含有限制酶識別序列,這就需要在對目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增時,在設(shè)計的目的基因引物的 5'
5'
(填“3'”或“5'”)端加上限制酶的識別序列。
(2)構(gòu)建RBD蛋白基因表達(dá)載體是制備疫苗的核心步驟,其目的是 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代,并能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且遺傳給下一代,并能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
?;虮磉_(dá)載體含有啟動子、終止子等成分,啟動子的作用是 RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位,驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
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(3)體外培養(yǎng)中國倉鼠卵巢細(xì)胞時,除了需要提供無菌、無毒的環(huán)境,還要定期更換培養(yǎng)液,其目的是 以便清除代謝產(chǎn)物,防止對細(xì)胞造成危害
以便清除代謝產(chǎn)物,防止對細(xì)胞造成危害
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(4)為進(jìn)一步檢測中國倉鼠卵巢細(xì)胞是否產(chǎn)生了RBD蛋白,需用 抗原-抗體雜交技術(shù)
抗原-抗體雜交技術(shù)
進(jìn)行檢測,該檢測方法的原理是 抗原抗體特異性結(jié)合
抗原抗體特異性結(jié)合
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