新冠病毒處于不斷的變異中，為了增強(qiáng)疫苗接種的有效性，科研人員擬將新冠病毒的S、N及E蛋白的主要抗原信息片段串聯(lián)成融合蛋白作為疫苗的有效成分，如圖為其研發(fā)思路。圖中①-⑤表示過程，表中為四種限制酶的識(shí)別序列。
| 限制酶 | NcoⅠ | SphⅠ | BamHⅠ | NheⅠ |
| 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) | C↓CATGG | GCATG↓C | G↓CTAGC | G↓GATCC |
cDNA
cDNA
序列，利用化學(xué)合成的方法得到目的基因，即融合基因，再使用 PCR
PCR
技術(shù)擴(kuò)增該基因。（2）圖中①過程為
構(gòu)建基因表達(dá)載體
構(gòu)建基因表達(dá)載體
，需先使用限制酶 NcoⅠ和NheⅠ
NcoⅠ和NheⅠ
切割質(zhì)粒pET-28a,相較于用同一種限制酶切，用兩種限制酶切的優(yōu)點(diǎn)是 防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
。（3）步驟②中用Ca2+處理大腸桿菌，然后將轉(zhuǎn)化后的菌液涂布于含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基長(zhǎng)出的菌落 是
是
（選填“是”或“不是”或“不一定是”）導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌。（4）可利用
抗原抗體雜交
抗原抗體雜交
法檢測(cè)該融合蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄。（5）利用大腸桿菌表達(dá)融合蛋白，可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模、高產(chǎn)量制備，但缺點(diǎn)是需要對(duì)獲得的蛋白質(zhì)進(jìn)行體外加工，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能角度分析，原因是大腸桿菌
是原核生物，無細(xì)胞器對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
是原核生物，無細(xì)胞器對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；PCR；構(gòu)建基因表達(dá)載體；NcoⅠ和NheⅠ；防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接；氨芐青霉素；是；抗原抗體雜交；是原核生物，無細(xì)胞器對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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