纖毛是廣泛存在的細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，功能異?？梢鸲喾N疾病。因此，研究纖毛形成的作用機(jī)制具有重要意義。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
（1）纖毛結(jié)構(gòu)如圖1所示，由細(xì)胞膜延伸形成的纖毛膜主要由

磷脂、蛋白質(zhì)

磷脂、蛋白質(zhì)

組成?；w由中心體轉(zhuǎn)變而來(lái)，中心體在有絲分裂中的功能是

發(fā)出星射線，形成紡錘體

發(fā)出星射線，形成紡錘體

。

（2）某病人腎小管上皮細(xì)胞纖毛異常，為了分析纖毛相關(guān)基因X是否發(fā)生了變異，對(duì)基因X進(jìn)行了PCR擴(kuò)增與產(chǎn)物測(cè)序。從細(xì)胞樣品中分離DNA時(shí)，可通過(guò)交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結(jié)合的DNA分離出來(lái)，溶液中添加NaCl至2.0mo1/L的目的是

溶解DNA

溶解DNA

。PCR擴(kuò)增時(shí)，需在

耐高溫DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

耐高溫DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

催化下，在引物

3′

3′

端進(jìn)行DNA鏈的延伸，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物用于測(cè)序。
（3）為研究蛋白質(zhì)X在細(xì)胞中的定位，構(gòu)建綠色熒光蛋白GFP與x的融合蛋白，融合蛋白具有綠色熒光，可示其在細(xì)胞內(nèi)位置。將X-GFP基因融合片段M導(dǎo)入如圖Ⅱ所示載體質(zhì)粒Y，構(gòu)建Y-M重組質(zhì)粒（在EcoRⅤ位點(diǎn)插入片段）。請(qǐng)完成下表。

分步實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)	簡(jiǎn)易操作、結(jié)果、分析
PCR鑒定正向重組質(zhì)粒Y-M（圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭，代表方向）	①選擇圖Ⅱ引物 a、b a、b ； ②PCR目的產(chǎn)物約為 1100 1100 bp。
確保M及連接處序列正確Y-M的連接處上游含有Hind III+EcoR V的識(shí)別序列，下游含有EcoR V+BamH I的識(shí)別序列	③質(zhì)粒測(cè)序，圖Ⅲ中正確的是 Q4 Q4 （選填序列編號(hào)）
檢測(cè)融合蛋白定位	④對(duì)照質(zhì)粒Y-GFP（僅表達(dá)GFP）與實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒Y-M分別導(dǎo)入細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組整個(gè)細(xì)胞均有綠色熒光，而實(shí)驗(yàn)組熒光集中在纖毛基部，說(shuō)明 X蛋白參與中心體形成 X蛋白參與中心體形成 。

（4）為研究另一纖毛病相關(guān)基因Z表達(dá)的變化，采用熒光定量PCR法檢測(cè)健康人與病人基因Z的轉(zhuǎn)錄水平。采集樣本、提取總RNA，經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

形成cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，在總cDNA模板量相等的條件下，健康人Ct值為15，而病人Ct值為20（Ct值是產(chǎn)物熒光強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)的PCR循環(huán)數(shù)）。從理論上估算，在PCR擴(kuò)增20個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物中，健康人樣品的目的產(chǎn)物大約是病人的

32

32

倍。