非洲豬瘟病毒（ASFV）是一種對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害巨大的DNA病毒，ASFV的P54蛋白與病毒入侵細(xì)胞有關(guān)，具有良好的免疫原性。研究人員利用大腸桿菌表達(dá)P54蛋白，以制備單克隆抗體。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）以人工合成的P54基因?yàn)槟０?，利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，PCR的全稱是

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

；該過(guò)程在95℃、55℃、72℃三個(gè)溫度下進(jìn)行循環(huán)，其中Taq酶發(fā)揮作用的溫度是

72℃

72℃

。
（2）用T₄DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒進(jìn)行連接，T₄DNA連接酶可連接

黏性末端和平

黏性末端和平

末端；連接后，由兩個(gè)DNA片段形成的連接物最多有

3

3

種。
（3）將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)的大腸桿菌中，在適宜培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，收集并破碎菌體，純化蛋白質(zhì)，利用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

技術(shù)進(jìn)行鑒定，可篩選出所需要的P54蛋白。
（4）將P54蛋白注入小鼠體內(nèi)，小鼠產(chǎn)生相應(yīng)抗體后，將B淋巴細(xì)胞與

骨髓瘤

骨髓瘤

細(xì)胞融合，獲得雜交瘤細(xì)胞，篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，注入小鼠

腹腔

腹腔

內(nèi)增殖，就可以獲得大量的單克隆抗體了；單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)有

特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備

特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備

（答出3點(diǎn)）。