丙酮酸羧化酶(PEP)和乙酰輔酶A羧化酶(ACC)是控制油菜中蛋白質(zhì)與油脂比例的關(guān)鍵酶。PEP反義基因是指反向連接在啟動(dòng)子之后的PEP基因,其轉(zhuǎn)錄的mRNA與PEP基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ),從而抑制PEP基因的表達(dá),提高油菜籽中的油脂含量。圖甲為某種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu),其中npt-Ⅱ?yàn)樾旅顾乜剐曰?,gus基因控制合成的酶能使β-葡萄糖苷酸水解為藍(lán)色物質(zhì),BamHⅠ、SacⅠ為限制酶,圖乙為PEP基因的結(jié)構(gòu),圖丙為丙酮酸的部分代謝過(guò)程。
回答下列問(wèn)題:
(1)質(zhì)粒中的T-DNA的作用是 轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。
(2)為方便將PEP反義基因與質(zhì)粒連接,一般將限制酶的識(shí)別序列連接到引物上,由圖甲、乙可知,與PEP基因下游結(jié)合的引物 5′5′(填“3′”或“5′”)端中應(yīng)加上 BamHⅠBamHⅠ(填“BamHⅠ”或“SacⅠ”)識(shí)別序列。
(3)在轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌時(shí),將PEP反義基因表達(dá)載體導(dǎo)入處于 能吸收周圍環(huán)境中DNA分子能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)的農(nóng)桿菌中,培育一段時(shí)間后,涂布到含有 新霉素和β-葡萄糖苷酸新霉素和β-葡萄糖苷酸的平板上,最終在平板上長(zhǎng)出白色和藍(lán)色兩種菌落,其中符合要求的是 白色菌落白色菌落。
(4)由圖丙可知,還可通過(guò) 對(duì)油菜的PEP基因進(jìn)行敲除使其失效對(duì)油菜的PEP基因進(jìn)行敲除使其失效(答出1種即可)方法改造油菜的遺傳物質(zhì)來(lái)提高油脂含量。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上;5′;BamHⅠ;能吸收周圍環(huán)境中DNA分子;新霉素和β-葡萄糖苷酸;白色菌落;對(duì)油菜的PEP基因進(jìn)行敲除使其失效
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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