美西螈具有很強(qiáng)的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制，科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（一）基因工程抗原的制備
（1）根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴(kuò)增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3'-OH與加入的脫氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是

5'→3'

5'→3'

（填“5'→3'”或“3'→5'”）。

（2）載體和CD14片段的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的酶切 抗性基因序列如圖1所示。用XhoI和SalⅠ分別酶切CD14圖1和載體后連接，CD14接入載體時(shí)會(huì)形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA?？蛇M(jìn)一步用這兩種限制酶對(duì)CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，理由是

正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點(diǎn)（限制酶的識(shí)別序列）；而反向連接的重組DNA會(huì)形成新的序列，沒(méi)有這兩種酶的酶切位點(diǎn)（沒(méi)有限制酶的識(shí)別序列）

正向連接的重組DNA有這兩種酶切位點(diǎn)（限制酶的識(shí)別序列）；而反向連接的重組DNA會(huì)形成新的序列，沒(méi)有這兩種酶的酶切位點(diǎn)（沒(méi)有限制酶的識(shí)別序列）

。
（3）培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。
（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：

（1）步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射

CD14蛋白/CD14抗原

CD14蛋白/CD14抗原

和

分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞

分泌抗CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞

。
（2）步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)是

能在體外無(wú)限增殖

能在體外無(wú)限增殖

。
（3）吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入

CD14蛋白

CD14蛋白

進(jìn)行專一抗體檢測(cè)，檢測(cè)過(guò)程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是

參與形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體

參與形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體

。
（4）步驟⑥從

小鼠腹水

小鼠腹水

中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測(cè)巨噬細(xì)胞。