回答與轉(zhuǎn)基因雷公藤培育過程有關(guān)的問題：
（1）將含

纖維素酶和果膠

纖維素酶和果膠

酶的混合液在55℃水浴鍋中活化，0.22μm微孔濾膜

過濾

過濾

滅菌。取雷公藤懸浮細(xì)胞，加入酶混合液，黑暗條件下

懸浮

懸浮

培養(yǎng)以分離原生質(zhì)體。
（2）原生質(zhì)體的活力檢測采用臺盼藍(lán)染色法（臺盼藍(lán)可穿透死細(xì)胞的細(xì)胞膜，使死細(xì)胞中的DNA著色，但無法進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)），原生質(zhì)體活力的計算方法為：

未被臺盼藍(lán)染色的原生質(zhì)體

未被臺盼藍(lán)染色的原生質(zhì)體

占該視野下原生質(zhì)體總數(shù)的百分比。
（3）由于原生質(zhì)體來源于黑暗條件下培養(yǎng)的雷公藤懸浮細(xì)胞，因此其細(xì)胞中不含

葉綠體

葉綠體

。將原生質(zhì)體與含

綠色熒光蛋白基因

綠色熒光蛋白基因

 的植物表達(dá)載體質(zhì)粒混合，在黑暗條件下完成轉(zhuǎn)化后，再用激光作掃描光源的顯微鏡觀察，統(tǒng)計發(fā)出綠色熒光的原生質(zhì)體數(shù)占觀察到的所有原生質(zhì)體數(shù)的百分比，以此確認(rèn)原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化效率。
（4）將轉(zhuǎn)化后的原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，重新長出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞。此時，應(yīng)該

降低

降低

培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，然后形成再生植株。再生植株需去除

根部殘留的培養(yǎng)基

根部殘留的培養(yǎng)基

處理并進(jìn)行鍛煉后才能移種大田。