在轉基因抗鹽煙草的研究過程中,采用了圖示質粒。其上有SalⅠ,HindⅢ和BamHⅠ三種限制酶切割位點,同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因,獲得此質粒的農桿菌表現(xiàn)出對兩種抗生素的抗性。
(1)在構建重組質粒時,選用 HindⅢHindⅢ和SalⅠ兩種限制酶切割目的基因的兩端及質粒,可防止 目的基因和質粒的自我環(huán)化或反向連接目的基因和質粒的自我環(huán)化或反向連接。
(2)用分別含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選農桿菌時,發(fā)現(xiàn)含有目的基因的農桿菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長,這說明 抗四環(huán)素基因被破壞抗四環(huán)素基因被破壞。
(3)采用農桿菌感染煙草細胞是因其體內的重組Ti質粒上的 T-DNAT-DNA能將目的基因插入到煙草細胞的染色體DNA上。
(4)用植物組織培養(yǎng)技術培育轉基因抗鹽煙草植株,依據(jù)的原理是 植物細胞的全能性植物細胞的全能性。
(5)導入抗鹽基因的煙草是否可以表達其遺傳特性,需檢測 抗鹽基因是否轉錄出mRNA,是否翻譯出蛋白質抗鹽基因是否轉錄出mRNA,是否翻譯出蛋白質,除上述分子水平檢測外還需進行 個體水平上抗鹽個體水平上抗鹽鑒定。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】HindⅢ;目的基因和質粒的自我環(huán)化或反向連接;抗四環(huán)素基因被破壞;T-DNA;植物細胞的全能性;抗鹽基因是否轉錄出mRNA,是否翻譯出蛋白質;個體水平上抗鹽
【解答】
【點評】
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