閱讀下列材料,完成19、20題
材料:鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素等都屬于氨基糖苷類(lèi)抗生素。細(xì)菌和多數(shù)線粒體的核糖體沉降系數(shù)為70S,可解離為50S和30S亞基,而真核細(xì)胞細(xì)胞所核糖體沉降系數(shù)為80S,可解離為60S和40S亞基。氨基糖苷類(lèi)抗生素通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)菌合成錯(cuò)誤蛋白質(zhì)或無(wú)法合成蛋白質(zhì)等;導(dǎo)致細(xì)菌死亡。氨基糖苷類(lèi)抗生素的殺菌機(jī)制主要有三種(如圖所示):①抑制30S核糖體亞基的組裝;②抑制tRNA的5′端成熟,導(dǎo)致tRNA無(wú)法與mRNA結(jié)合;③導(dǎo)致非互補(bǔ)配對(duì)的tRNA也能夠結(jié)合于mRNA上。鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素等既可用于臨床上細(xì)菌感染的治療,也廣泛應(yīng)用于基因工程中微生物的選擇培養(yǎng)。
質(zhì)粒是基因工程中廣泛使用的載體,為獲得適宜的質(zhì)粒,對(duì)大腸桿菌的質(zhì)粒A和質(zhì)粒B進(jìn)行改造。如圖為質(zhì)粒A和質(zhì)粒B的示意圖,其中EcoR1和BumH1為限制酶識(shí)別部位;ori為復(fù)制原點(diǎn);npt表示卡那霉素抗性基因,str表示鏈霉素抗性基因;gfp表示綠色熒光蛋白基因(質(zhì)粒B中不含其啟動(dòng)子),其產(chǎn)物在紫外線照射下可發(fā)出綠色熒光;Pl是含有受乳糖誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)子的序列;P2是通用啟動(dòng)子序列。
(1)質(zhì)粒中啟動(dòng)子的作用是是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位。
(2)質(zhì)粒B作為載體時(shí)可直接作為標(biāo)記基因的是strstr。
(3)已知三個(gè)或三個(gè)以上DNA片段發(fā)生連接的幾率很小,可忽略:兩個(gè)或兩個(gè)以上質(zhì)粒難以同時(shí)進(jìn)入大腸桿菌:含有兩個(gè)或兩個(gè)以上ori的質(zhì)粒無(wú)法在大腸桿菌內(nèi)復(fù)制。為獲得可發(fā)綠色熒光的大腸桿菌。進(jìn)行以下操作:
①將含質(zhì)粒A和質(zhì)粒B的混合溶液中加入限制酶EcoR1和BamH1EcoR1和BamH1,充分反應(yīng)后加入DNA連接酶,再將產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌;
②將這些大腸桿菌涂布在含有鏈霉素鏈霉素的固體培養(yǎng)基上在適宜條件下培養(yǎng)24h,能淘汰掉部分不含綠色熒光蛋白基因的大腸桿菌菌落;
③含有目標(biāo)質(zhì)粒的大腸桿菌需要在培養(yǎng)基中加入乳糖乳糖能在紫外線照射下發(fā)出綠色熒光。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的部位;str;EcoR1和BamH1;鏈霉素;乳糖
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/12/12 8:0:1組卷:10引用:0難度:0.7
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