IKK激酶參與動(dòng)物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒KK基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃,導(dǎo)致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制,研究人員利用純合野生鼠應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠(純合),主要過(guò)程如圖1、2。分析回答:
(1)在PCR反應(yīng)體系中,需加入引物、IKKB基因、緩沖液、Mg2+等外,還需加入Taq酶/耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶、4種脫氧核苷酸(dNTP)Taq酶/耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶、4種脫氧核苷酸(dNTP)等。
(2)在圖1獲取突變基因過(guò)程中,需要以下3種引物:
引物A | 5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′(下劃線字母為突變堿基) |
引物B | 5′-TAAGCTTCGAACATCCTA--3′(下劃線部分為限制酶HindⅢ識(shí)別序列) |
引物C | 5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′(下劃線部分為限制酶SacⅠ識(shí)別序列) |
引物A和引物B
引物A和引物B
,PCR2中使用的引物有引物C
引物C
和圖中大引物的②
②
(①②)鏈。(3)PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃3min;94℃30s,58℃30s,72℃50s,30個(gè)循環(huán)。在循環(huán)之前的94℃3min處理為預(yù)變性;循環(huán)中72℃處理的目的是
Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈合成
Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈合成
。(4)據(jù)圖2分析代孕母鼠對(duì)移入子宮的胚胎基本不發(fā)生免疫反應(yīng),這為
胚胎在受體內(nèi)存活
胚胎在受體內(nèi)存活
提供了可能。(5)研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠F0,并確認(rèn)突變基因已經(jīng)穩(wěn)定同源替代IKK基因,請(qǐng)你設(shè)計(jì)完成獲得SCID模型鼠的實(shí)驗(yàn)步驟:
①雜交親本:
F0×野生鼠
F0×野生鼠
,雜交得F1;②F1雌雄鼠隨機(jī)交配得F2;
③提取F2每只小鼠的基因組DNA,采用分子生物學(xué)方法,利用TKK基因探針和突變基因探針進(jìn)行篩選,則
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
為模型鼠。【答案】Taq酶/耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶、4種脫氧核苷酸(dNTP);引物A和引物B;引物C;②;Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈合成;胚胎在受體內(nèi)存活;F0×野生鼠;IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:75引用:2難度:0.6
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發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6 -
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