報(bào)告基因是指一類易于檢測且實(shí)驗(yàn)材料本身不具備的基因。阿爾茨海默?。ˋD)是由淀粉樣前體蛋白(APP)過量表達(dá)導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病,用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因作為報(bào)告基因,將EGFP基因與 APP 基因融合,可方便、經(jīng)濟(jì)、快速地篩選出促進(jìn)人 APP mRNA降解的藥物。研究表明,EGFP與APP 基因融合后,雖能全部轉(zhuǎn)錄但僅有 ECFP蛋白得到表達(dá)。EGFP基因與 APP 基因融合過程如圖所示。
(1)APP751、EGFP基因的cDNA 是以其mRNA 為模板經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程形成的,將其儲(chǔ)存于細(xì)菌質(zhì)粒中,屬于構(gòu)建 基因文庫(部分基因文庫或cDNA文庫)
基因文庫(部分基因文庫或cDNA文庫)
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(2)據(jù)圖分析,Klenow 酶的作用是 將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端
將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端
。切割 peDNA3.1質(zhì)粒獲得APP751基因時(shí),研究人員沒有選擇直接用HindⅢ、XbaⅠ同時(shí)切割,而是歷經(jīng)①→②→③的復(fù)雜過程,原因是 直接用HindⅢ、XhaⅠ同時(shí)切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端,才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接
直接用HindⅢ、XhaⅠ同時(shí)切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端,才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接
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(3)COS-7是來源于非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)這類細(xì)胞時(shí),為保證細(xì)胞生長和避免污染,應(yīng)分別在合成培養(yǎng)基中添加 血漿、血清和抗生素
血漿、血清和抗生素
,傳代培養(yǎng)不宜超過 10 代,原因是 細(xì)胞在傳至10代后,增減減緩乃至停止,部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化
細(xì)胞在傳至10代后,增減減緩乃至停止,部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化
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