寨卡病毒(ZIKV)是一種可通過蚊蟲叮咬等途徑傳播的單股正鏈RNA病毒,該病毒編碼的NS2B蛋白在病毒復(fù)制、組裝及致病過程中具有重要作用。通過基因工程技術(shù)構(gòu)建攜帶NS2B基因的重組原核表達(dá)質(zhì)粒,采用大腸桿菌作為表達(dá)菌株,通過誘導(dǎo)表達(dá)、純化獲得NS2B目的蛋白。用純化后的NS2B蛋白通過如圖示過程制備抗NS2B蛋白的單克隆抗體,圖中X、Y表示相關(guān)細(xì)胞。請回答下列相關(guān)問題:
(1)通過基因工程技術(shù)構(gòu)建可表達(dá)NS2B蛋白大腸桿菌菌株,該操作技術(shù)的核心是 基因(NS2B蛋白合成基因)表達(dá)載體的構(gòu)建基因(NS2B蛋白合成基因)表達(dá)載體的構(gòu)建。首先需獲得NS2B蛋白合成基因,其途徑為:提取ZIKV的RNA,通過 逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄)過程獲取相應(yīng)的DNA,再利用 限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)選擇性切割DNA獲得NS2B蛋白合成基因。
(2)若要對NS2B蛋白合成基因進(jìn)行擴(kuò)增,常用技術(shù)的原理及該技術(shù)使用的酶依次是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制、Taq酶(或熱穩(wěn)定DNA聚合酶)Taq酶(或熱穩(wěn)定DNA聚合酶)。
(3)圖中對X進(jìn)行篩選需要做 專一抗體(陽性)專一抗體(陽性)檢測,通過篩選獲得的細(xì)胞Y具有的特點是 既能無限增殖,又能產(chǎn)生特異性抗體既能無限增殖,又能產(chǎn)生特異性抗體,單克隆抗體最廣泛的應(yīng)用是 用作體外診斷試劑用作體外診斷試劑。
【答案】基因(NS2B蛋白合成基因)表達(dá)載體的構(gòu)建;逆轉(zhuǎn)錄(反轉(zhuǎn)錄);限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶);DNA雙鏈復(fù)制;Taq酶(或熱穩(wěn)定DNA聚合酶);專一抗體(陽性);既能無限增殖,又能產(chǎn)生特異性抗體;用作體外診斷試劑
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:25引用:4難度:0.5
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