人類猴痘由Yaba猴病毒(雙鏈DNA病毒)引起,實時熒光定量PCR(qPCR)可用于Yaba猴病毒的快速檢測。進行aPCR時,在反應體系加入Taqman探針,Taqman探針兩端連有熒光基團(R)和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(Q),完整的Taqman探針不發(fā)出熒光,當探針被水解后R基團會發(fā)出熒光(如圖1所示),隨循環(huán)次數的增加,熒光信號強度增加。

(1)采用qPCR檢測Yaba猴病毒需在一定的 緩沖緩沖溶液中才能進行,反應體系中還需提供DNA模板、原料、引物引物、Taqman探針、TaqDNA聚合酶、Mg2+等。aPCR過程中,TagDNA聚合酶的兩個作用是 催化合成DNA 子鏈;催化探針水解催化合成DNA 子鏈;催化探針水解。
(2)qPCR檢測病毒的核酸一般具有特異性強和靈敏度高的特點,這與反應體系中加入的 引物引物和 探針探針有關。但有時也可能會出現(xiàn)“假陰性”的結果??赡艿脑蛴?取樣不規(guī)范;取樣所獲樣本量不足;病毒發(fā)生了基因突變取樣不規(guī)范;取樣所獲樣本量不足;病毒發(fā)生了基因突變(答出兩點)。
(3)在PCR反應體系中一般都要加入Mg2+,原因是 TaqDNA 聚合酶需要Mg2+激活TaqDNA 聚合酶需要Mg2+激活。為了探究業(yè)Mg2+對PCR擴增效果的影響,科研人員在PCR反應體系中加入不同濃度的Mg2+進行了實驗。結果如圖2所示,據此可得出的結論有 在不含 Mg2+的緩沖液中靶基因幾乎無法擴增;在不同濃度的Mg2+緩沖液中靶基因的擴增效果不同;在實驗濃度下,4mM 為最佳濃度在不含 Mg2+的緩沖液中靶基因幾乎無法擴增;在不同濃度的Mg2+緩沖液中靶基因的擴增效果不同;在實驗濃度下,4mM 為最佳濃度。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】緩沖;引物;催化合成DNA 子鏈;催化探針水解;引物;探針;取樣不規(guī)范;取樣所獲樣本量不足;病毒發(fā)生了基因突變;TaqDNA 聚合酶需要Mg2+激活;在不含 Mg2+的緩沖液中靶基因幾乎無法擴增;在不同濃度的Mg2+緩沖液中靶基因的擴增效果不同;在實驗濃度下,4mM 為最佳濃度
【解答】
【點評】
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