自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中N₂的細菌，將玉米種子用自身固氮菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量?？蒲腥藛T進行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖1。請回答：

（1）步驟①土樣應(yīng)取自當?shù)?

表層

表層

（填“表層”或“深層”）土壤；步驟②需充分振蕩20min,主要目的是

使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中

使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中

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（2）步驟③將土壤懸浮液稀釋了

1000

1000

倍，步驟④所用的接種工具是

涂布器

涂布器

。
（3）下表為兩種培養(yǎng)基的配方，步驟④應(yīng)選其中的

Ashby

Ashby

培養(yǎng)基，并加入瓊脂后進行高壓蒸汽滅菌、倒平板。純化培養(yǎng)時，需同時進行未接種培養(yǎng)基的培養(yǎng)，目的是

檢測培養(yǎng)基是否被雜菌污染

檢測培養(yǎng)基是否被雜菌污染

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Ashby培養(yǎng)基：甘露醇（C₆H₁₄O₆）10g,KH₂PO₄0.2g,MgSO4?7H₂O0.2g,NaCl0.2g,K₂SO₄0.3g,CaCO₃5g,蒸餾水1000mL。
LB培養(yǎng)基：蛋白胨1g,酵母提取物5g,NaCl5g,蒸餾水1000mL，pH7.0-7.2
（4）將純化的固氮菌置于完全培養(yǎng)液中擴大培養(yǎng)48小時，經(jīng)離心后收集下層細胞并轉(zhuǎn)移至特定培養(yǎng)基中進行固氮能力的測定，篩選出固氮能力最強的菌種CM12為進一步鑒定其固氮，科研人員選用發(fā)芽一致的玉米種子進行3組盆栽實驗，30d后測定土壤微生物有機氮含量，結(jié)果如圖2。
CK：對照處理組
N：尿素處理組（每盆土壤中50mL有氮全營養(yǎng)液：成分為在1000mL無氮植物營養(yǎng)液中加入0.12g尿素）CM12：自生固氮菌CM12處理組（每盆土壤澆50mL接種自身固氮菌的無氮植物營養(yǎng)液）
①對照組（CK）的處理為

每盆土壤澆50mL無氮植物營養(yǎng)液

每盆土壤澆50mL無氮植物營養(yǎng)液

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②自生固氨菌較共生固氮菌（如根瘤菌）的應(yīng)用范圍更廣，原因是

自生固氮菌能在土壤中獨立固氮，不受宿主的限制

自生固氮菌能在土壤中獨立固氮，不受宿主的限制

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