人類的P53基因(抑癌基因)位于17號(hào)染色體上,細(xì)胞靜止時(shí),P53基因表達(dá)的P53蛋白量很低,但在進(jìn)行增殖的細(xì)胞中,P53蛋白量可升高5~100倍。大象含有多對(duì)P53基因,推測(cè)這是其很少患癌的主要原因。為研究人P53基因在乳腺癌細(xì)胞中的作用,某科研小組構(gòu)建了如圖所示的基因表達(dá)載體?;卮鹣铝袉栴}:
(1)基因工程中所使用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲取?;蛭膸彀?
cDNA文庫(部分基因文庫)
cDNA文庫(部分基因文庫)
和
基因組文庫
基因組文庫
。用PCR技術(shù)擴(kuò)增P53基因的過程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶,其最顯著的特點(diǎn)是
耐高溫(或熱穩(wěn)定性高)
耐高溫(或熱穩(wěn)定性高)
。
(2)構(gòu)建的基因表達(dá)載體中,除了圖中標(biāo)明的DNA片段外,箭頭處的片段是
啟動(dòng)子
啟動(dòng)子
其具有的功能是
RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn),能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄
RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn),能驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄
,標(biāo)記基因能將含有P53基因的受體細(xì)胞篩選出來,標(biāo)記基因一般是
抗生素抗性基因(或熒光蛋白基因)
抗生素抗性基因(或熒光蛋白基因)
。
(3)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞時(shí),由于癌細(xì)胞增殖不會(huì)出現(xiàn)
接觸抑制
接觸抑制
現(xiàn)象,因此不需要用胰蛋白酶處理。為檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞是否表達(dá)出P53蛋白,可采用的方法是
抗原-抗體雜交(或檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中的P53蛋白量)
抗原-抗體雜交(或檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中的P53蛋白量)
。