鐮孢菌引起的小麥赤霉病被稱為小麥“游癥”，是威脅糧食安全的重大國際性難題。我國科學家從小麥近緣屬植物長穗偃麥草中首次克隆出主效抗赤霉病基因Fhb7（編碼一種谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶），為解決小麥赤霉病的世界性難題提供了“金鑰匙”。研究發(fā)現(xiàn)，用光誘導型啟動子（PrbcS）能夠使Fhb7基因表達，其結(jié)合T基因后能使Fhb7基因更高水平表達。
（1）PrbcS是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，能被 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結(jié)合，驅(qū)動基因的持續(xù) 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄。
（2）通過PCR技術(shù)擴增Fhb7基因片段，反應(yīng)過程一般由95℃熱變性、55～60℃引物和模板配對、72℃延伸三個步驟，經(jīng)過多次循環(huán)完成。延伸階段選用72℃綜合考慮了兩個因素，這兩個因素是 防止DNA變性防止DNA變性和 保持Taq酶活性所需溫度條件保持Taq酶活性所需溫度條件，若研究人員在反應(yīng)緩沖溶液中加入4種dNTP時，誤加入了單一種類的ddNTP（即2、3雙脫氧核苷三磷酸，在脫氧核糖的3位置缺少一個羧基），則子鏈會停止延伸，分析其原因是 3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵。
（3）如圖中甲、乙均為Fhb7基因表達載體構(gòu)建過程中的中間載體，請分析重組載體的部分構(gòu)建過程。
（注：Kmr為卡那霉素抗性基因，origin為復(fù)制原點，其余為限制酶酶切位點）
區(qū)別含有中間載體甲-PrbcS-*T與含有重組載體乙-PrbcS-*T的微生物的方法是 用含有卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)用含有卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)。經(jīng)酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.3kb,經(jīng)圖示信息分析，PrbcS-T的長度約為 1.8kb1.8kb。據(jù)圖分析，形成重組載體乙-PrbcS-*T，需要使用限制酶 EcoRⅠEcoRⅠ切割，圖中重組載體乙-PrbcS-*T問號處有 EcoRⅠSphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤEcoRⅠSphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ種限制酶的酶切位點。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】RNA聚合酶；轉(zhuǎn)錄；防止DNA變性；保持Taq酶活性所需溫度條件；3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵；用含有卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)；1.8kb；EcoRⅠ；EcoRⅠSphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：2難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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