基因測(cè)序技術(shù)在臨床和科研中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，該技術(shù)通常包括核酸提取、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)3個(gè)步驟。
（1）已知SDS（十二烷基硫酸鈉）可以使蛋白質(zhì)變性，在利用真核生物做材料進(jìn)行DNA粗提取時(shí)，通常在研磨液中加入SDS的目的是

使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離

使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離

。DNA粗提取過(guò)程中常用到體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，其作用是

分離DNA和蛋白質(zhì)

分離DNA和蛋白質(zhì)

。
（2）測(cè)序技術(shù)通常需要用PCR技術(shù)擴(kuò)增待測(cè)分子。如表是某研究小組設(shè)計(jì)的兩組引物，其中不合理的是

B

B

，原因是

引物太短、特異性弱；兩個(gè)引物會(huì)互補(bǔ)結(jié)合

引物太短、特異性弱；兩個(gè)引物會(huì)互補(bǔ)結(jié)合

。

引物	序列
A	5′-GCCCTCTACTCCCCGGTCTTG-3′ 5′-GCCCATCTGCAAGTTATCCTA-3′
B	5′-GGGATT-3′ 5′-AATCCC-3

（3）第一代測(cè)序技術(shù)又叫雙脫氧鏈終止法，它以DNA合成反應(yīng)為基礎(chǔ)。如圖是該技術(shù)的測(cè)序原理和某待測(cè)DNA序列的電泳圖譜。在反應(yīng)體系中加入dNTP（2′，3′-雙脫氧核苷三磷酸）的作用是

dNTP的3'端不能形成磷酸二酯鍵導(dǎo)致復(fù)制停止，形成長(zhǎng)短不一的DNA片段

dNTP的3'端不能形成磷酸二酯鍵導(dǎo)致復(fù)制停止，形成長(zhǎng)短不一的DNA片段

。據(jù)圖分析，待測(cè)DNA片段的堿基序列是3′

-GACTGCCA-或-TGGCAGTC-

-GACTGCCA-或-TGGCAGTC-

5′。

（4）第二代測(cè)序又稱為高通量測(cè)序。二代測(cè)序在DNA復(fù)制過(guò)程中通過(guò)捕捉新添加的堿基所攜帶的特殊標(biāo)記（一般為熒光分子標(biāo)記）來(lái)確定DNA的序列。這就要求在測(cè)序時(shí)，DNA分子必須同步復(fù)制，來(lái)增強(qiáng)熒光信號(hào)強(qiáng)度從而讀出DNA序列。據(jù)此分析，二代測(cè)序技術(shù)不適合測(cè)量較

長(zhǎng)

長(zhǎng)

（填“長(zhǎng)”或“短”）的DNA序列，原因是

DNA分子越長(zhǎng)，基因復(fù)制的同步性降低，導(dǎo)致堿基測(cè)序質(zhì)量下降

DNA分子越長(zhǎng)，基因復(fù)制的同步性降低，導(dǎo)致堿基測(cè)序質(zhì)量下降

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