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多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）可自動化重復(fù)進行圖1所示的①～③步驟，每完成一次①～③步驟稱為完成一個循環(huán)。
（1）完成PCR過程所用的Taq酶作用于
磷酸二酯
磷酸二酯
鍵，完成該過程的三次循環(huán)后產(chǎn)生的DNA分子中含有引物B的比例為
7
8
7
8
。

（2）某研究小組擬用PCR技術(shù)和引物
2和3
2和3
（填引物的序號）從圖2所示DNA分子中擴增出編碼蛋白質(zhì)H的基因，并開展后續(xù)研究。
（3）通過上述PCR反應(yīng)獲得編碼蛋白質(zhì)H的基因片段后，擬將其插入質(zhì)粒pZHY1中構(gòu)建重組DNA分子pZHY2。已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4種限制酶的識別序列（如表），則應(yīng)選用的限制酶組合是
D
D
。

EcoRⅠ BamHⅠ KpnⅠ XbaⅠ

G^↓AATTC
CTTAA_↑G G^↓GATCC
CCTAG_↑G GGTAC^↓C
C_↑CATGG T^↓CTAGA
AGATC_↑T

A．BamHⅠ和EcoRⅠ
B．EcoRⅠ和XbaⅠ
C．EcoRⅠ和KpnⅠ
D． BamHⅠ和KpnⅠ
（4）將重組DNA分子pZHY2導(dǎo)入大腸桿菌后，就可通過大規(guī)模培養(yǎng)大腸桿菌，然后制備純化的蛋白質(zhì)H。若要制備抗蛋白質(zhì)H的單克隆抗體，相關(guān)說法中錯誤的有
BC
BC
。（多選）
A．可以用上述步驟所得純化的蛋白質(zhì)H作為抗原
B．從動物的脾臟收集B淋巴細(xì)胞，并使之與雜交瘤細(xì)胞融合
C．單克隆抗體是經(jīng)選擇性培養(yǎng)基的篩選所得到的B淋巴細(xì)胞，進行培養(yǎng)而產(chǎn)生的抗體
D．電刺激可用于制備單克隆抗體和植物體細(xì)胞雜交，也可用于動物體細(xì)胞核移植

【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；單克隆抗體及其應(yīng)用．

【答案】磷酸二酯；

；2和3；D；BC

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：74引用：2難度：0.6

相似題

1．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進行生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：
（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的半保留復(fù)制過程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA的復(fù)制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進行PCR擴增示意圖。

催化①過程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個堿基，其中C有15個，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經(jīng)過以上若干過程后共獲得8個雙鏈 DNA，此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內(nèi)DNA復(fù)制的原理，進行生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。請回答有關(guān)問題：

（1）PCR反應(yīng)的基本步驟是變性、復(fù)性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復(fù)制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術(shù)獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應(yīng)管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應(yīng)的緩沖液等物質(zhì)外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應(yīng)。圖1表示細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過程，有一條子鏈?zhǔn)窍群铣啥痰腄NA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細(xì)胞內(nèi)染色體DNA的復(fù)制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測序技術(shù)的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復(fù)制隨機終止，產(chǎn)生四組不同長度的一系列終止處帶有標(biāo)記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質(zhì)）上進行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過程橫線①中應(yīng)該加入的物質(zhì)是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進行電泳……”，請解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結(jié)果如圖2所示，請寫出待測DNA分子的序列

。
（4）某同學(xué)要通過PCR技術(shù)獲得被³²P標(biāo)記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已經(jīng)有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	XbaⅠ
G^↓AATTC CTTAA_↑G	G^↓GATCC CCTAG_↑G	GGTAC^↓C C_↑CATGG	T^↓CTAGA AGATC_↑T