某種類型的白血病由蛋白P引發(fā),蛋白UBC可使P被蛋白酶識(shí)別并降解,藥物A可通過(guò)影響這一過(guò)程對(duì)該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機(jī)理,需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P,F(xiàn)LAG是一種短肽,連接在P或P△的氨基端,使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合,但不影響P或P△的功能。
(1)為構(gòu)建重組載體,需先設(shè)計(jì)引物,通過(guò)PCR特異性擴(kuò)增P基因。用于擴(kuò)增P基因的引物需滿足的條件是 兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割,需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列,該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的 5'端5'端(填“3′端”或“5′端”)。
(2)PCR擴(kuò)增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后,與編碼FLAG的序列形成一個(gè)融合基因,如圖甲所示,其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后,融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確,翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確,但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析,出現(xiàn)該問題的原因是 在轉(zhuǎn)錄得到的mRNA序列中,EcoRⅠ識(shí)別序列的后兩個(gè)堿基與P基因?qū)?yīng)的第一個(gè)堿基構(gòu)成一個(gè)密碼子,導(dǎo)致翻譯時(shí)核糖體讀取的密碼子順序發(fā)生改變,從而使翻譯出的氨基酸序列改變在轉(zhuǎn)錄得到的mRNA序列中,EcoRⅠ識(shí)別序列的后兩個(gè)堿基與P基因?qū)?yīng)的第一個(gè)堿基構(gòu)成一個(gè)密碼子,導(dǎo)致翻譯時(shí)核糖體讀取的密碼子順序發(fā)生改變,從而使翻譯出的氨基酸序列改變。修改擴(kuò)增P基因時(shí)使用的帶有EcoRⅠ識(shí)別序列的引物來(lái)解決該問題,具體修改方案是 在EcoRⅠ識(shí)別序列前后增加堿基,使融合基因中FLAG基因的堿基數(shù)目加上P基因的堿基數(shù)為3的倍數(shù),從而保證翻譯時(shí)P基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA也能被正確讀取在EcoRⅠ識(shí)別序列前后增加堿基,使融合基因中FLAG基因的堿基數(shù)目加上P基因的堿基數(shù)為3的倍數(shù),從而保證翻譯時(shí)P基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA也能被正確讀取。
(3)融合蛋白表達(dá)成功后,將FLAG-P、FLAG-P△、藥物A和UBC按照?qǐng)D乙中的組合方式分成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質(zhì),分離出與介質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)并用UBC抗體檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC,由①②③組結(jié)果的差異推測(cè),藥物A的作用是 促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合;由②④組或③⑤組的差異推測(cè),P△中缺失的特定序列的作用是 P△中缺失的特定序列是與UBC結(jié)合的關(guān)鍵序列P△中缺失的特定序列是與UBC結(jié)合的關(guān)鍵序列。
(4)根據(jù)以上結(jié)果推測(cè),藥物A治療該病的機(jī)理是 藥物A促進(jìn)UBC與P的結(jié)合,從而促進(jìn)蛋白P被蛋白酶識(shí)別并降解,達(dá)到治療的目的藥物A促進(jìn)UBC與P的結(jié)合,從而促進(jìn)蛋白P被蛋白酶識(shí)別并降解,達(dá)到治療的目的。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì);5'端;在轉(zhuǎn)錄得到的mRNA序列中,EcoRⅠ識(shí)別序列的后兩個(gè)堿基與P基因?qū)?yīng)的第一個(gè)堿基構(gòu)成一個(gè)密碼子,導(dǎo)致翻譯時(shí)核糖體讀取的密碼子順序發(fā)生改變,從而使翻譯出的氨基酸序列改變;在EcoRⅠ識(shí)別序列前后增加堿基,使融合基因中FLAG基因的堿基數(shù)目加上P基因的堿基數(shù)為3的倍數(shù),從而保證翻譯時(shí)P基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA也能被正確讀取;促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合;P△中缺失的特定序列是與UBC結(jié)合的關(guān)鍵序列;藥物A促進(jìn)UBC與P的結(jié)合,從而促進(jìn)蛋白P被蛋白酶識(shí)別并降解,達(dá)到治療的目的
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:357引用:6難度:0.6
相似題
-
1.紅細(xì)胞生成素(EPO)是人體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白,可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來(lái)源極為有限,某科研團(tuán)隊(duì)采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器,使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6 -
2.煙草是我國(guó)一些地區(qū)的經(jīng)濟(jì)作物之一,提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟(jì)收入。我國(guó)科研團(tuán)隊(duì)研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種,抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程(①~⑤)如圖所示。回答下列問題:
(1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
(2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
(3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過(guò)程
(4)⑤過(guò)程需要用到發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5 -
3.如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn),如圖為某種質(zhì)粒和目的基因,箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中,以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說(shuō)法正確的是( ?。?
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
把好題分享給你的好友吧~~