科研人員通過敲除里氏木霉基因組中去乙?;富颍℉DAC),探究組蛋白乙?;瘜w維素酶基因表達的影響,其主要過程如圖1。請據圖回答問題。
(1)PCR反應體系中,除加入引物和模板DNA外,一般還需要加入
Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等
Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等
。在最后一個循環(huán)結束后通常還需要維持72℃7min,其目的是
使子鏈充分延伸(或充分反應,獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)
使子鏈充分延伸(或充分反應,獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)
。
(2)引物設計是PCR的關鍵,本研究中引物R
1的5'端添加與引物Fc互補的序列,其目的是
便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)
便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)
。在PCR5中加入的引物是
R2和FG
R2和FG
。
(3)在原生質體轉化過程中,加入適量的CaCl
2和PEG溶液,其目的是
促進外源DNA分子進入原生質體(或使原生質體變成感受態(tài))
促進外源DNA分子進入原生質體(或使原生質體變成感受態(tài))
。涂布時,涂布器用
灼燒滅菌(或酒精引燃)
灼燒滅菌(或酒精引燃)
法滅菌后將原生質體接種到含
新霉素
新霉素
的固體培養(yǎng)基上篩選。
(4)為探究敲除基因HDAG后對纖維素酶基因(CBHI、EGLI)和纖維素酶基因激活因子基因XYR1轉錄的影響,研究中先提取
(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細胞的總RNA(或總RNA)
(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細胞的總RNA(或總RNA)
,再利用熒光RT-PCR技術檢測,結果如圖2。依據結果可以得出的結論是
敲除基因HDAC使細胞中組蛋白去乙?;溉狈Γ毎薪M蛋白乙?;潭雀撸梢燥@著提高纖維素酶基因的表達
敲除基因HDAC使細胞中組蛋白去乙?;溉狈Γ毎薪M蛋白乙?;潭雀?,可以顯著提高纖維素酶基因的表達
。