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科研人員通過敲除里氏木霉基因組中去乙?;富颍℉DAC),探究組蛋白乙?;瘜w維素酶基因表達的影響,其主要過程如圖1。請據圖回答問題。
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(1)PCR反應體系中,除加入引物和模板DNA外,一般還需要加入
Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等
Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等
。在最后一個循環(huán)結束后通常還需要維持72℃7min,其目的是
使子鏈充分延伸(或充分反應,獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)
使子鏈充分延伸(或充分反應,獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)

(2)引物設計是PCR的關鍵,本研究中引物R1的5'端添加與引物Fc互補的序列,其目的是
便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)
便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)
。在PCR5中加入的引物是
R2和FG
R2和FG
。
(3)在原生質體轉化過程中,加入適量的CaCl2和PEG溶液,其目的是
促進外源DNA分子進入原生質體(或使原生質體變成感受態(tài))
促進外源DNA分子進入原生質體(或使原生質體變成感受態(tài))
。涂布時,涂布器用
灼燒滅菌(或酒精引燃)
灼燒滅菌(或酒精引燃)
法滅菌后將原生質體接種到含
新霉素
新霉素
的固體培養(yǎng)基上篩選。
(4)為探究敲除基因HDAG后對纖維素酶基因(CBHI、EGLI)和纖維素酶基因激活因子基因XYR1轉錄的影響,研究中先提取
(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細胞的總RNA(或總RNA)
(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細胞的總RNA(或總RNA)
,再利用熒光RT-PCR技術檢測,結果如圖2。依據結果可以得出的結論是
敲除基因HDAC使細胞中組蛋白去乙?;溉狈Γ毎薪M蛋白乙?;潭雀撸梢燥@著提高纖維素酶基因的表達
敲除基因HDAC使細胞中組蛋白去乙?;溉狈Γ毎薪M蛋白乙?;潭雀?,可以顯著提高纖維素酶基因的表達
。
【答案】Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等;使子鏈充分延伸(或充分反應,獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段);便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因);R2和FG;促進外源DNA分子進入原生質體(或使原生質體變成感受態(tài));灼燒滅菌(或酒精引燃);新霉素;(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細胞的總RNA(或總RNA);敲除基因HDAC使細胞中組蛋白去乙酰化酶缺乏,細胞中組蛋白乙?;潭雀撸梢燥@著提高纖維素酶基因的表達
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有,未經書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:27引用:2難度:0.7
相似題
  • 1.“微衛(wèi)星DNA”是一類廣泛分布于真核生物核DNA中的簡單重復序列,以1~6個核苷酸為基本單位,重復次數在不同個體和品種間有較大可變性,可作為一種標記對基因進行定位。
    (1)由于兩側序列高度保守,可利用PCR技術對重復次數不同的微衛(wèi)星DNA加以鑒定,如圖1.請在方框中補充C組PCR產物電泳結果的大致位置。
     

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    (2)研究人員以純種紫心大白菜為父本、純種非紫心大白菜為母本進行雜交,F(xiàn)1自交后共收獲F2植株330株,其中紫心245株,非紫心85株。實驗結果表明
     
    是顯性性狀,推測相關基因的傳遞符合
     
    定律。
    (3)為了對大白菜的紫心基因進行有效標記和定位,研究人員針對已知的微衛(wèi)星標記A710兩側序列設計引物,并對兩親本和部分F2個體的DNA進行PCR擴增,產物電泳結果如圖2.由此初步推測:大白菜紫心、非紫心基因與標記A710位于同一對染色體上。圖2紫心F2單株中,最可能是雜合子的有
     
    (填數字編號)。若上述推測成立,請解釋非紫心F2單株中10號和12號擴增后的電泳結果
     
    。
    (4)研究人員發(fā)現(xiàn),位于標記A710附近的Br基因內部存在CTC重復序列,且該序列在兩親本中重復次數不同,如圖3所示。對全部F2個體中的Br基因片段進行PCR擴增,如果
     
    個體的擴增結果中有長度為78個堿基對的片段,
     
    個體的擴增結果中有長度為87個堿基對的片段,則可證明大白菜紫心和非紫心基因與Br基因位于同一對染色體上且完全連鎖,由此可知Br基因可對大白菜紫心基因進行更有效的標記和定位。
    (5)根據“微衛(wèi)星DNA”的特點判斷,應用這種標記可進行的研究有
     
    (填字母)。
    A.人類親子鑒定              B.物種或品種間親緣關系鑒定
    C.誘導基因突變              D.物種和基因多樣性研究
    發(fā)布:2024/9/19 2:0:8組卷:48引用:2難度:0.3
  • 2.全面接種新冠疫苗可有效防止新冠病毒的大規(guī)模傳染。新冠疫苗有多種類型,如滅活疫苗、重組疫苗、mRNA疫苗等。重組疫苗的研發(fā)可以利用腺病毒作為載體。請回答下列問題:
    (1)新冠病毒依賴其表面的S蛋白與宿主細胞膜上ACE2受體結合而最終實現(xiàn)感染。ACE2受體的化學本質是
     
    。該結合過程體現(xiàn)了細胞膜
     
    功能。
    (2)新冠病毒是一種RNA病毒。研制疫苗時,需利用RT-PCR技術獲取S蛋白基因,該過程除逆轉錄酶外,還有
     
    酶參與,此酶需要
     
    (離子)的激活。PCR的最后一個循環(huán)結束后通常還需要在72℃維持7min左右,其目的是
     

    (3)腺病毒是一種DNA病毒,基因組中的E基因與其復制有關。將其作為運載S蛋白基因的載體時,需對腺病毒進行的改造是
     
    ,以提高該種新冠疫苗的安全性。
    (4)接種滅活疫苗一般需2~3次,而接種重組DNA疫苗一般只需1次,根據疫苗作用原理和人體特異性免疫反應機制分析,可能的原因是
     
    。
    (5)在基因組中敲除并整合基因,其技術流程通常如圖1所示。
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    ①利用大腸桿菌DNA進行PCR,無需從細胞中提取DNA,可在培養(yǎng)出菌落后直接挑取菌落進行,分析其原因是
     
    ,DNA得以釋放。
    ②利用PCR獲得對應產物的關鍵是
     
    設計。
    ③PCR5時需要加入的引物是
     
    。
    ④利用電泳技術鑒定PCR產物,結果如圖2。其中陽性泳道使用的樣品是熒光基因M,可與待測泳道中DNA進行對比;標準泳道使用的樣品是不同已知長度(大?。┑腄NA片段,作用是
     
    。
    發(fā)布:2024/9/9 4:0:8組卷:9引用:2難度:0.6
  • 3.DNA分子雜交時,常需要大量的單鏈DNA探針。不對稱PCR是一種常見的單鏈DNA探針制備方法,其原理是反應體系中加入一對數量不相等的引物。在PCR反應的早期10-15個循環(huán)中,擴增產物主要是雙鏈DNA,當后期數量較少的限制性引物耗盡后,數量較多的非限制性引物將引導合成大量目標DNA單鏈。
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    (1)若A鏈為所需的DNA分子探針,則非限制性引物應選用引物
     
    ;PCR反應緩沖體系中一般要添加
     
    以激活耐高溫的DNA聚合酶。
    (2)進行最初10-15個循環(huán)的目的是
     
    。如果體系中原模板DNA的數量為a,最初10次循環(huán)產物為雙鏈,后15次循環(huán)產物為單鏈,則最終獲得的單鏈探針數為
     
    。因為DNA單鏈與雙鏈的分子量不同,可通過
     
    將單鏈探針DNA分離出米。
    (3)為精確控制產物生成量,科學家嘗試設計了較長的非限制性引物與較短的限制性引物,在進行一定的循環(huán)次數后,適當提高復性溫度以避免殘留限制性引物與模板結合。高復性溫度條件下限制性引物不能結合模板鏈的原因是
     
    。
    發(fā)布:2024/9/9 0:0:8組卷:7引用:2難度:0.6
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