CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可以按照人們的意愿精準(zhǔn)剪切、改變?nèi)我獍谢虻倪z傳信息，對該研究有突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家被授予2020年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)?？茖W(xué)家正設(shè)想利用基因編輯技術(shù)將豬基因組中“敲入”某種調(diào)節(jié)因子，抑制抗原決定基因的表達(dá)，培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的豬器官，解決人類移植器官短缺的難題。請回答下列問題：
（1）欲獲得大量的調(diào)節(jié)因子，可以利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)體系中需要加入一定的Taq酶和足量的引物（循環(huán)次數(shù)越多，引物加入量越大）等，引物需要足量的原因是

每一條子鏈的形成都需要一個(gè)引物，這個(gè)引物就成為子鏈的一部分，不能再重復(fù)利用

每一條子鏈的形成都需要一個(gè)引物，這個(gè)引物就成為子鏈的一部分，不能再重復(fù)利用

。
（2）CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)中，SgRNA是根據(jù)靶基因設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA，準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9切割與SgRNA配對的靶基因DNA序列，由此可見，Cas9在功能上屬于

限制性核酸內(nèi)切

限制性核酸內(nèi)切

酶，切割的是DNA中的

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵。
（3）在相關(guān)實(shí)驗(yàn)過程中，為了確認(rèn)豬細(xì)胞中抗原決定基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)，常用的檢測方法是

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

。若檢測結(jié)果為

沒有出現(xiàn)雜交帶

沒有出現(xiàn)雜交帶

，則表明調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用。
（4）將含有調(diào)節(jié)因子的豬細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁現(xiàn)象。為了使細(xì)胞更好地貼壁生長，要求培養(yǎng)瓶內(nèi)表面

光滑、無毒，易于貼附

光滑、無毒，易于貼附

。
（5）為了獲得沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因豬，需要將調(diào)節(jié)因子已經(jīng)發(fā)揮作用的豬細(xì)胞的細(xì)胞核移入

去核卵母細(xì)胞

去核卵母細(xì)胞

中，用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，使其完成

細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程（分裂和分化）

細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程（分裂和分化）

，再進(jìn)行胚胎移植獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬。