新冠病毒在人體細(xì)胞表面蛋白受體由ACE2控制表達(dá)，該基因的開放閱讀框（mRNA 從起始密碼子到終止密碼子之間的核苷酸序列）cDNA序列大小為2418bp（bp表示堿基對(duì)），在280bp和1070bp位點(diǎn)分別有一個(gè)HindⅢ和Xho I酶切位點(diǎn)（圖1）。甲、乙兩位同學(xué)通過分子生物學(xué)方法克隆該基因到 pMD18-T載體（圖2）中，各自的測(cè)序結(jié)果如圖4，并進(jìn)一步通過雙酶切獲得ACE2基因編碼序列與pEGFP-N1（圖2）載體重組（MCS多酶切位點(diǎn)序列如圖3所示）并表達(dá)。試分析回答下列問題：
（1）根據(jù)圖2可知，兩種載體都具有的基本結(jié)構(gòu)有 復(fù)制原點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)和 標(biāo)記基因標(biāo)記基因限制酶切割位點(diǎn)。
（2）ACE2基因與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)化后細(xì)胞需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選的原因是 載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr。
（3）甲、乙兩位同學(xué)均得到ACE2基因的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體的重組質(zhì)粒，針對(duì)ACE2基因的部分測(cè)序結(jié)果如圖4，并進(jìn)一步利用圖4中標(biāo)記的限制酶進(jìn)行雙酶切，獲得ACE2基因編碼序列，同時(shí)用相同限制酶酶切 pEGFP-N1載體，然后構(gòu)建重組質(zhì)粒。兩位同學(xué)對(duì)獲得的重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切檢測(cè)：①甲同學(xué)只得到空載體；②乙同學(xué)在重組質(zhì)粒中檢測(cè)到了1348 bp 部分目的基因片段。請(qǐng)對(duì)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析：
①甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒。
②乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】復(fù)制原點(diǎn)；標(biāo)記基因；載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr；甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒；乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp，ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：1引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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