當前位置： 2022-2023學年遼寧省遼南協(xié)作校高二（下）期末生物試卷> 試題詳情

土壤鹽漬化影響水稻生長發(fā)育，將水稻耐鹽堿基因OsMYB56導入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育耐鹽堿水稻新品種，其操作流程及可能用到的限制酶如圖，其中bar為抗除草劑基因，Tet^r為四環(huán)素抗性基因，Amp³為氨芐青霉素抗性基因，①～⑦表示操作過程，請回答下列問題：

限制酶 BamHⅠ BclⅠ smaⅠ Sau3AⅠ

識別位點及切割位點 -G↓GATCC- -T↓GATCA- -CCC↓GGG- -↓GATC-

（1）過程①PCR擴增OsMYB56基因時加需要添加引物，其作用是
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
；應選用引物組合
a、d
a、d
。
a.5'-CTTGGATGAT-3'
b.5'-TAAGTTGTCT-3'
c.5'-TAGTAGGTTC-3'
d.5'-TCTGTTGAAT-3'
e.5'ATTCAACAGA-3'
f.5'ATCATCCAAG-3'
（2）根據(jù)基因表達載體的結構組成分析，Ti質(zhì)粒中的CaMV35S是
啟動子
啟動子
；OsMYB56基因和bar基因編碼鏈的方向
相反
相反
（填“相同”或“相反”）。
（3）過程③應選用限制酶
BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
切割質(zhì)粒，利用所選限制酶進行操作的優(yōu)勢是
防止酶切后的質(zhì)粒自身環(huán)化，保證OsMYB56和酶切后的質(zhì)粒定向連接
防止酶切后的質(zhì)粒自身環(huán)化，保證OsMYB56和酶切后的質(zhì)粒定向連接
，切割后需要用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
進行連接才能獲得重組質(zhì)粒。
（4）為了篩選出含重組質(zhì)粒的受體細胞，④過程應在添加
四環(huán)素
四環(huán)素
的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)后獲得的菌落不能判定是否含有重組質(zhì)粒，原因是
含未重組Ti質(zhì)粒（或普通Ti質(zhì)粒）的受體細胞也能正常生長
含未重組Ti質(zhì)粒（或普通Ti質(zhì)粒）的受體細胞也能正常生長
。
（5）轉基因水稻對鹽堿環(huán)境具有較強適應性，但安全性也需要引起重視。從基因安全的角度考慮，培育和種植過程需要完成下列哪些工作
ACD
ACD
。
A．轉化過程殘留農(nóng)桿菌及其廢棄的培養(yǎng)基等，需要經(jīng)滅菌后專門化處理
B．對轉基因水稻進行鹽堿脅迫實驗和除草劑抗性實驗，完成個體生物學水平的鑒定
C．轉基因水稻移植到大田后，要劃定隔離區(qū)，防止OsMYB56和bar基因通過花粉傳播
D．進行嚴密的毒理性評價、致敏性評價、營養(yǎng)學評價等食用或飼用安全評估

【答案】使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸；a、d；啟動子；相反；BclⅠ和SmaⅠ；防止酶切后的質(zhì)粒自身環(huán)化，保證OsMYB56和酶切后的質(zhì)粒定向連接；T4DNA連接酶；四環(huán)素；含未重組Ti質(zhì)粒（或普通Ti質(zhì)粒）的受體細胞也能正常生長；ACD

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/7/3 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.6

相似題

1．RNA沉默是雙鏈RNA被特異性的核酸酶降解，產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA），這些siRNA與同源的靶RNA互補結合，特異降解靶RNA，從而抑制基因表達。棉蚜是棉花的主要害蟲，嚴重危害棉花的生產(chǎn)。E基因是棉蚜生長發(fā)育的重要基因，為了控制棉蚜對棉花的危害，科研人員通過轉基因技術，在棉花中表達棉蚜E基因的雙鏈RNA（dsRNA），特異性抑制棉蚜內(nèi)源E基因的表達。如圖是主要流程，請回答：

限制酶識別序列和切點

EcoRⅠ G↓AATTC

KpnⅠ G↓GTACC

BamHⅠ G↓GATCC

XbaⅠ T↓CTAGA

（1）根據(jù)PCR1反應體系中加入的引物1和2推測PCR2中加入的引物為

。
A．5'-AAATCTAGAAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
B．5'-AAATCTAGACTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
C．5'-AAAGGATCCAGCGACTCAAGATCATGGAGTAT-3'
D．5'-AAAGGATCCCTGCCACTTCTTCAACTAATTCT-3'
（2）從理論上推測，PCR1第五輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物1的DNA片段所占的比例為

。圖中正義序列和反義序列中堿基排列順序

（填“大多數(shù)相同”或“大多數(shù)不同”或“相同”或“不同”）。過程①需要的工具酶除限制酶外還需要

。
（3）過程②將表達載體轉化到經(jīng)

處理的農(nóng)桿菌菌株后，為了確定重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉化可以通過

驗證。
（4）過程④愈傷組織形成棉花植株的過程稱為

。轉基因棉花再生植株移栽到溫室后，葉片涂抹

檢測抗性，并提取DNA進行PCR分析。
（5）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉化的4株棉花植株葉片的基因組DNA，用HindⅢ完全消化，消化產(chǎn)物經(jīng)電泳、轉膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結果如圖2所示（圖中數(shù)字2～5代表轉化成功的植株，數(shù)字1代表對照組）。下列有關分析正確的有

。
①對照組可以用非轉基因棉花的基因組DNA進行實驗
②數(shù)字3所代表的植株中目的基因插入染色中的兩個不同位置
③選擇HindⅢ進行消化的原因是基因組DNA中一般只有1～2切點
④相同位置上雜交帶對應DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（6）科研人員進一步鑒定上述4號泳道對應的植株，確定獲得一株轉基因抗性植株CZ4，CZ4連續(xù)自交兩代，則F₂中抗性植株占比為

。

發(fā)布：2024/10/17 17:0:4組卷：11引用：1難度：0.4

解析

2．某研究小組利用水稻細胞培育能產(chǎn)生HPV（人乳頭瘤病毒）-L1蛋白的水稻胚乳細胞生物反應器，為獲得HPV-L1蛋白提供一種新的高效、低廉的途徑，用于制備HPV疫苗。其基本流程包括表達載體的構建、農(nóng)桿菌轉化、水稻細胞轉化、轉基因植株的篩選等步驟，最終獲得能產(chǎn)生含HPV-L1蛋白胚乳細胞的轉基因水稻?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR是獲取HPV-L1基因的一種方法，PCR反應體系設計的兩種引物，在引物間和引物內(nèi)的堿基都不能互補，其原因是

。
（2）農(nóng)桿菌轉化：科研人員構建了如圖所示的表達載體，將其與經(jīng)過Ca²⁺處理后的農(nóng)桿菌細胞混合，隨后將菌液涂布在含

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑取菌落進行PCR鑒定后再擴大培養(yǎng)待用。
（3）水稻細胞轉化：取水稻離體組織置于誘導培養(yǎng)基啟動子潮霉素啟動子抗性基因中發(fā)生

過程形成愈傷組織。挑取生長良好的愈傷組織加入到（2）中得到的菌液中共培養(yǎng)，完成轉化過程。
（4）轉基因水稻的篩選：將轉化處理后的水稻愈傷組織放在含

（抗生素）的培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，并誘導出轉基因水稻。
（5）水稻胚乳生物反應器具有提取和處理產(chǎn)物簡易、生產(chǎn)成本低和生物安全性高等特點，從而被廣泛應用。請在分子水平上提出兩個提高水稻胚乳生物反應器產(chǎn)物產(chǎn)量的思路：

。
發(fā)布：2024/10/25 0:0:1組卷：5引用：1難度：0.5
解析
3．α-淀粉酶被廣泛應用于生產(chǎn)過程中。為獲得催化活性高的α-淀粉酶，科研人員利用細菌進行改造。
（1）α-淀粉酶能將

水解為低聚糖和單糖，其催化活性高低往往取決于該酶活性中心的

結構。
（2）科研人員提取枯草芽孢桿菌的表達載體，插入大腸桿菌復制原點以及氨芐青霉素抗性基因，構建如圖所示重組穿梭載體。
①根據(jù)α-淀粉酶活性中心的氨基酸序列，通過

工程得到α-淀粉酶突變基因。
②構建圖中所示重組穿梭載體需要的酶是

。插入大腸桿菌復制原點的目的是

。
③將含有α-淀粉酶突變基因的重組穿梭載體導入

的大腸桿菌細胞中。將大腸桿菌菌液涂布于含

的選擇培養(yǎng)基上，待長出菌落后，用PCR方法檢驗成功轉化的細胞。
（3）培養(yǎng)轉化成功的大腸桿菌并從中提取重組穿梭載體，導入枯草芽孢桿菌。將培養(yǎng)得到的枯草桿菌菌液涂布于含淀粉的培養(yǎng)基上，一段時間后選擇

的菌落，從中可篩選得到催化活性較高的α-淀粉酶。
（4）請舉一例說明本實驗獲得的催化活性高的α-淀粉酶在生產(chǎn)中的應用價值：

。
發(fā)布：2024/10/25 17:0:1組卷：13引用：1難度：0.6
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限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	smaⅠ	Sau3AⅠ
識別位點及切割位點	-G↓GATCC-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

限制酶	識別序列和切點
EcoRⅠ	G↓AATTC
KpnⅠ	G↓GTACC
BamHⅠ	G↓GATCC
XbaⅠ	T↓CTAGA