生長(zhǎng)素參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)，生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)鞍祝≒INI）對(duì)IAA的極性運(yùn)輸具有重要作用。為研究³⁵S啟動(dòng)子（一種來(lái)自病毒的強(qiáng)啟動(dòng)子）能否引起下游基因的過(guò)量表達(dá)，研究人員將³⁵S啟動(dòng)子與PINI基因轉(zhuǎn)入擬南芥，觀察PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響。
（1）獲取PINI基因的mRNA后，通過(guò)RTPCR擴(kuò)增獲取PINI基因（DNA）時(shí)所需要的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶

逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶

。每次PCR循環(huán)分為3步，其中所需溫度最低的一步稱為

復(fù)性

復(fù)性

。
（2）PINI基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建PINI表達(dá)載體。構(gòu)建PINI表達(dá)載體的目的是

保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)

保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)

。
（3）為將PINI基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切。在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖1分析，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是

EcoRⅠ和PstⅠ

EcoRⅠ和PstⅠ

。

（4）提取轉(zhuǎn)基因擬南芥的DNA，用相應(yīng)引物擴(kuò)增出³⁵S啟動(dòng)子和PINI基因，為檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入擬南芥，應(yīng)電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的

³⁵S

³⁵S

，不檢測(cè)另一種的原因是

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

。據(jù)圖2可知，也可在個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè)，方法是

本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響，因此需要首先確定³⁵S是否存在使用除草劑來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)除草劑的抗性

本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響，因此需要首先確定³⁵S是否存在使用除草劑來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)除草劑的抗性

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