枯草芽孢桿菌盛產(chǎn)的蛋白酶，在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。為篩選枯草芽孢桿菌的蛋白酶高產(chǎn)株，將分別浸過(guò)不同菌株（a～e）的分泌物提取液及無(wú)菌水（f）的無(wú)菌圓紙片置于含某種高濃度蛋白質(zhì)的平板培養(yǎng)基表面：在37℃溫箱中放置2～3天，結(jié)果如圖1．圖2是枯草芽孢桿菌的蛋白酶和其它酶的熱穩(wěn)定性數(shù)據(jù)（酶在不同溫度下保溫足夠長(zhǎng)的時(shí)間，再在酶活性最高的溫度下測(cè)其酶活性）。請(qǐng)回答問(wèn)題：

（1）在培養(yǎng)包括枯草芽孢桿菌在內(nèi)的異養(yǎng)型微生物時(shí)，培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)包括水、

無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源

無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源

（填3種），配制圖1培養(yǎng)基的基本步驟是計(jì)算→稱(chēng)量→

溶化

溶化

→滅菌→倒平板。
（2）大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)首選的菌株是

a

a

（用字母回答）：菌株b提取物周?chē)鷽](méi)有形成明顯清晰區(qū)的可能原因是

不能合成蛋白酶

不能合成蛋白酶

。
（3）在該蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)程中，通常需對(duì)發(fā)酵液在60～70℃保溫一定時(shí)間，再制備酶制劑。在60～70℃保溫一定時(shí)間的作用是

大幅度降低發(fā)酵液中其他酶的活性

大幅度降低發(fā)酵液中其他酶的活性

。
（4）欲從a菌株中提取和分離相關(guān)蛋白酶，一般步驟為

樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定（答完整給分）

樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定（答完整給分）

。分離出來(lái)的樣品加入到

凝膠色譜柱

凝膠色譜柱

進(jìn)行洗脫，待蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)用試管收集流出液。