胰蛋白酶抑制劑能干擾昆蟲的代謝，引起昆蟲死亡，但對(duì)人體無害?？茖W(xué)家將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因（Pin-Ⅱ）通過農(nóng)桿菌導(dǎo)入楊樹細(xì)胞，培育成了抗蟲楊樹。
注：左圖表示含目的基因的DNA分子，下圖表示質(zhì)粒，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒DNA復(fù)制的起點(diǎn)。箭頭表示識(shí)別序列完全不同的4種限制酶的酶切位點(diǎn)。
回答下列問題：
（1）要獲得大量的目的基因，通常采用PCR擴(kuò)增技術(shù)，在PCR擴(kuò)增儀中已加入了一定的緩沖溶液、含目的基因的DNA分子、Mg2+，還需要加入的物質(zhì)有 分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種引物、4種脫氧核苷酸（dNTP）和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種引物、4種脫氧核苷酸（dNTP）和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。通過PCR技術(shù)擴(kuò)增Pin-Ⅱ基因片段，反應(yīng)過程一般由95℃熱變性、55～60℃引物和模板配對(duì)、72℃延伸三個(gè)步驟，經(jīng)過多次循環(huán)完成。延伸階段選用72℃而非95℃綜合考慮了兩個(gè)因素，這兩個(gè)因素是 防止DNA變性防止DNA變性和 保持Taq酶活性所需溫度條件保持Taq酶活性所需溫度條件。
（2）圖中的質(zhì)粒在基因工程操作中通常用作載體，能在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在，除含有Ampr，Neor和多個(gè)限制酶切位點(diǎn)外，質(zhì)粒還具有的主要特點(diǎn)是 對(duì)受體細(xì)胞無害、具有自我復(fù)制的能力對(duì)受體細(xì)胞無害、具有自我復(fù)制的能力。
（3）依據(jù)圖中信息，寫出高效構(gòu)建含Pin-Ⅱ基因片段的重組質(zhì)粒的簡要操作方法：將含目的基因的DNA分子和質(zhì)?；旌?，加入EcoRⅠ和PstⅠ，再加入DNA連接酶，即可構(gòu)建重組質(zhì)粒將含目的基因的DNA分子和質(zhì)?；旌?，加入EcoRⅠ和PstⅠ，再加入DNA連接酶，即可構(gòu)建重組質(zhì)粒。
（4）用轉(zhuǎn)基因楊樹葉片喂養(yǎng)某種楊樹害蟲，發(fā)現(xiàn)害蟲死亡率顯著增加，與非轉(zhuǎn)基因的楊樹細(xì)胞相比較，此轉(zhuǎn)基因楊樹的葉片細(xì)胞中，可以檢測到的物質(zhì)有 胰蛋白酶抑制劑基因胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑基因的mRNA胰蛋白酶抑制劑基因的mRNA、胰蛋白酶抑制劑蛋白胰蛋白酶抑制劑蛋白。（寫3項(xiàng)）
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種引物、4種脫氧核苷酸（dNTP）和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）；防止DNA變性；保持Taq酶活性所需溫度條件；對(duì)受體細(xì)胞無害、具有自我復(fù)制的能力；將含目的基因的DNA分子和質(zhì)?；旌希尤隕coRⅠ和PstⅠ，再加入DNA連接酶，即可構(gòu)建重組質(zhì)粒；胰蛋白酶抑制劑基因；胰蛋白酶抑制劑基因的mRNA；胰蛋白酶抑制劑蛋白
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：4引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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