斑馬魚的HuC基因在早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中選擇性表達(dá),研究人員構(gòu)建了HuC基因的表達(dá)載體,并導(dǎo)入到斑馬魚細(xì)胞中研究其作用,請(qǐng)回答:
(1)為獲取HuC基因,研究人員從早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中提取HuC基因的mRNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴(kuò)增逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得大量的DNA,進(jìn)而構(gòu)建出HuC基因的cDNA文庫(kù)cDNA文庫(kù)。
(2)DraⅢ,SnaBⅠ等是質(zhì)粒上不同限制酶的切割位點(diǎn)。為獲得HuC基因--綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體,需要對(duì)HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的EcoRⅠ酶和BamHⅠEcoRⅠ酶和BamHⅠ酶進(jìn)行切割,這樣做的原因是可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接。不選擇NotⅠ酶切割的原因是破壞標(biāo)記基因無(wú)法篩選破壞標(biāo)記基因無(wú)法篩選。
(3)用Ca2+處理大腸桿菌,大腸桿菌細(xì)胞即能夠吸收周圍環(huán)境中的DNA分子吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落或者在培養(yǎng)基中添加卡那霉素卡那霉素,篩選出導(dǎo)入表達(dá)載體的大腸桿菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴(kuò)增;cDNA文庫(kù);EcoRⅠ酶和BamHⅠ;可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接;破壞標(biāo)記基因無(wú)法篩選;吸收周圍環(huán)境中的DNA分子;表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落;卡那霉素
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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