不飽和脂肪酸具有重要的醫(yī)療價值和營養(yǎng)價值，但哺乳動物自身缺乏去飽和酶基因（Fat-1），因此自身所需的不飽和脂肪酸只能從食物中獲取，下面是制備Fat-1轉(zhuǎn)基因奶牛的技術(shù)路線：研究人員從線蟲中篩選出Fat-1基因，進(jìn)行相關(guān)優(yōu)化處理后，構(gòu)建成Fat-1基因表達(dá)載體，如圖所示，接著將表達(dá)載體導(dǎo)入到奶牛的胚胎成纖維細(xì)胞，最后培育出轉(zhuǎn)基因奶牛。請回答下列問題：
（1）Fat-1基因的優(yōu)化：由于密碼子具有

簡并性

簡并性

，而不同生物編碼同一種氨基酸的密碼子存在偏好性的差異，因此需要把從線蟲中獲取的Fat-1基因進(jìn)行優(yōu)化，把線蟲的基因遺傳編碼方式改變?yōu)榕５木幋a方式以利于在受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。據(jù)此推測，優(yōu)化后的Fat-1基因與優(yōu)化前相比：

ABD

ABD

（多項(xiàng)選擇）
A．堿基序列有一定程度的改變
B．編碼的氨基酸序列沒有改變
C．編碼的氨基酸序列往往變化
D．可提高該基因在牛細(xì)胞中翻譯的效率
（2）構(gòu)建Fat-1基因表達(dá)載體：在對優(yōu)化后的Fat-1基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，設(shè)計(jì)加入

SacⅠ、PpaⅠ

SacⅠ、PpaⅠ

酶切位點(diǎn)，便于構(gòu)建如圖所示的基因表達(dá)載體。若生產(chǎn)富含不飽和脂肪酸的牛奶，需要將Fat-1基因與

乳腺蛋白基因的啟動子（乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動子）

乳腺蛋白基因的啟動子（乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動子）

等調(diào)控元件重組在一起。
（3）轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞的篩選與鑒定：將經(jīng)過轉(zhuǎn)化處理的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)在含有

新霉素

新霉素

的選擇培養(yǎng)液中培養(yǎng)，培養(yǎng)時需要定期更換培養(yǎng)液，原因是

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害

。對能存活的細(xì)胞進(jìn)行

DNA分子雜交

DNA分子雜交

檢測，篩選出Fat-1基因成功整合到其基因組中的受體細(xì)胞。
（4）培育Fat-1轉(zhuǎn)基因奶牛：請用上述篩選成功的轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，簡要寫出培育Fat-1轉(zhuǎn)基因奶牛的實(shí)驗(yàn)思路

將轉(zhuǎn)基因成功的成纖維細(xì)胞（核）注入去核卵母細(xì)胞中，構(gòu)建重組胚胎，將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)，發(fā)育得到Fat-1轉(zhuǎn)基因奶牛

將轉(zhuǎn)基因成功的成纖維細(xì)胞（核）注入去核卵母細(xì)胞中，構(gòu)建重組胚胎，將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)，發(fā)育得到Fat-1轉(zhuǎn)基因奶牛

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