四尾柵藻是一種淡水藻類，繁殖快、適應(yīng)性強(qiáng)，可作為制備生物柴油的重要原料之一。為提高四尾柵藻的油脂含量，研究人員將從含油量高的紫蘇中獲得的二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶基因DGAT1與pBI121質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化成功獲得高產(chǎn)油脂四尾柵藻，主要研究過(guò)程如圖，其中DGAT1-F（5′-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3′）和DGAT1-R（5′-CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3′）是以DGAT1基因?yàn)橐罁?jù)設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，LacZ基因編碼產(chǎn)物在X-gal和IPTG存在下，可以產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）過(guò)程①中需要的酶有 逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶，過(guò)程②應(yīng)選用的限制酶是 BamHⅠBamHⅠ和 XbaⅠXbaⅠ。
（2）過(guò)程③經(jīng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過(guò) 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法（方法）接種到培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。為篩選獲得目標(biāo)菌株，培養(yǎng)基應(yīng)加入的成分有 氨卡青霉素、X-gal、IPTG氨卡青霉素、X-gal、IPTG。
（3）用兩種限制酶切割DGAT1和pB1121，將其連接成重組表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入四尾柵藻細(xì)胞中，與單酶切相比，雙切酶的優(yōu)點(diǎn)是 使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，防止目的基因與載體自身環(huán)化使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，防止目的基因與載體自身環(huán)化（答出兩點(diǎn)即可）。
（4）為檢測(cè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化四尾柵藻的情況及確定目的基因是否表達(dá)，研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)完成下表。
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 簡(jiǎn)要操作過(guò)程 |
| 初篩培養(yǎng) | 經(jīng)轉(zhuǎn)化后的四尾柵藻接種于含 卡那霉素 卡那霉素 的BG11固體培養(yǎng)基并放置于人工氣候箱培養(yǎng)，一段時(shí)間后觀察其生長(zhǎng)情況 |
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擴(kuò)大培養(yǎng) 擴(kuò)大培養(yǎng)
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在BG11固體培養(yǎng)基上分別挑取數(shù)個(gè)單藻落接種至BG11液體培養(yǎng)基中光照搖床培養(yǎng)，編號(hào)備用 |
| PCR驗(yàn)證 | 收集四尾柵藻藻體，提取基因組DNA，以DGAT1-F和DGAT1-R為引物，進(jìn)行PCR驗(yàn)證，未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻作對(duì)照 |
| 油脂含量測(cè)定 | 利用索氏抽提法測(cè)定 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 的油脂含量 |
| 結(jié)果處理 | 統(tǒng)計(jì)并比較PCR驗(yàn)證結(jié)果及藻體中油脂的含量 |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶；BamHⅠ；XbaⅠ；稀釋涂布平板法；氨卡青霉素、X-gal、IPTG；使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，防止目的基因與載體自身環(huán)化；卡那霉素；擴(kuò)大培養(yǎng)；等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7