科學家利用基因編輯技術(shù)將抑癌基△Np63a定點插入小鼠胰腺癌細胞中，以研究其在胰腺癌細胞中的作用。具體方法是：設(shè)計特定的sgRNA序列，構(gòu)建Cas9-SgRNA質(zhì)粒（如圖甲），將其導(dǎo)入胰腺癌細胞并表達。sgRNA能識別并結(jié)合胰腺癌細胞基因組DNA中特定序列，引導(dǎo)Cas9蛋白對特定位點進行剪切，使DNA雙鏈斷裂（如圖乙）。攜帶ANP△Np63α基因的供體質(zhì)粒與斷裂DNA的高度同源序列（同源臂）發(fā)生互換，從而將△Np63α基因定點插入胰腺癌細胞基因中（如圖丙）
（1）圖甲所示的Cas9-sgRNA質(zhì)粒中，新霉素抗性基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有Cas9基因和sgRNA基因，從而將含Cas9基因和sgRNA 基因的細胞篩選出來鑒別受體細胞中是否含有Cas9基因和sgRNA基因，從而將含Cas9基因和sgRNA 基因的細胞篩選出來，除去圖示結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)有的結(jié)構(gòu)是終止子終止子。
（2）Cas9蛋白可對特定的DNA序列切割，在功能上最接近于限制限制酶。將Cas9-sgRNA質(zhì)粒和供體質(zhì)粒導(dǎo)入胰腺癌細胞的方法是顯微注射法顯微注射法。
（3）若要檢驗△Np63α基因是否已導(dǎo)入成功，可使用DNA分子雜交（或：PCR）DNA分子雜交（或：PCR）技術(shù)?！鱊p63α基因成功轉(zhuǎn)化的胰腺癌細胞體外培養(yǎng)時，在細胞水平上可能發(fā)生的變化有細胞停止分裂，細胞形態(tài)發(fā)生改變，恢復(fù)（出現(xiàn)）接觸抑制現(xiàn)象細胞停止分裂，細胞形態(tài)發(fā)生改變，恢復(fù)（出現(xiàn)）接觸抑制現(xiàn)象。
（4）在上述基因編輯過程中，下列核酸序列中應(yīng)已知堿基排序的有ABCABC。
A.sgRNA識別序列
B.同源臂1
C.同源臂2
D.CMV啟動子
（5）此技術(shù)優(yōu)于傳統(tǒng)基因工程之處在于可將目的基因定點插入所需位點，而不是隨機插入可將目的基因定點插入所需位點，而不是隨機插入。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】鑒別受體細胞中是否含有Cas9基因和sgRNA基因，從而將含Cas9基因和sgRNA 基因的細胞篩選出來；終止子；限制；顯微注射法；DNA分子雜交（或：PCR）；細胞停止分裂，細胞形態(tài)發(fā)生改變，恢復(fù)（出現(xiàn)）接觸抑制現(xiàn)象；ABC；可將目的基因定點插入所需位點，而不是隨機插入
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：14引用：2難度：0.7
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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