GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，對損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護(hù)作用，研究人員構(gòu)建了GDNF基因的表達(dá)載體（如圖1所示），并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于細(xì)胞基因治療的研究，請回答：

（1）在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是

使細(xì)胞分散開

使細(xì)胞分散開

；
（2）構(gòu)建含GCDNF基因的表達(dá)載體時，需選擇圖1中的

XhoⅠ

XhoⅠ

限制酶進(jìn)行酶切．
（3）經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有3種：單個載體自連、CDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）為鑒定這3種連接方式，選擇HpaⅠ酶和BamⅡ酶對篩選得到的載體進(jìn)行雙酶切，并對酶切后的DNA片透進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示，圖中第

②

②

泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的．
（4）將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的

抗體

抗體

與提取的蛋白質(zhì)雜交，當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定密度時，需進(jìn)行

傳代

傳代

培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于細(xì)胞干細(xì)胞移植治療實驗．