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普通PCR在擴增DNA的過程中存在一定概率的堿基錯誤配對，得到部分的錯誤產物。巢式PCR是一種在普通PCR基礎上改良的新型PCR技術，擴增的精確性比普通PCR更高。巢式PCR對目標DNA進行擴增時需要用到兩對不同的引物，首先使用第一對引物（外引物）對目標DNA進行第一次擴增得到中間產物，然后使用第二對引物（內引物）對中間產物進行第二次擴增得到目標產物，過程如圖所示。請回答相關問題：

（1）PCR的原理是
DNA的復制
DNA的復制
，PCR反應體系一般都需要加入一定量的，其作用是
激活DNA聚合酶
激活DNA聚合酶
。
（2）巢式PCR通常在第一支試管中進行第一次擴增，然后把得到的中間產物分離出來轉移到另外一支試管中進行第二次擴增反應，兩次擴增不在同一支試管中擴增的原因是
防止內引物直接參與第一次的擴增，無法實現巢式PCR高精確性擴增的目的
防止內引物直接參與第一次的擴增，無法實現巢式PCR高精確性擴增的目的
。使用瓊脂糖凝膠電泳對模板DNA與中間產物分離時，由于中間產物的分子量較小，所以相同時間內在凝膠中的遷移距離更
大
大
。
（3）如果巢式PCR第一次擴增得到的某中間產物的部分堿基發(fā)生了替換，則第二次擴增時內引物與該中間產物配對并擴增的概率
降低
降低
。如果想進一步減少錯誤目標產物的產生，還可以適當
提高
提高
（填“提高”或“降低”）復性的溫度。

【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．

【答案】DNA的復制；激活DNA聚合酶；防止內引物直接參與第一次的擴增，無法實現巢式PCR高精確性擴增的目的；大；降低；提高

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：5引用：2難度：0.5

相似題

1．PCR是利用體內DNA復制的原理，進行生物體外復制特定 DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題：
（1）PCR反應的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學家研究發(fā)現 DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體 DNA的半保留復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內染色體 DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結構如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應的緩沖液等物質外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進行PCR擴增示意圖。

催化①過程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個堿基，其中C有15個，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經過以上若干過程后共獲得8個雙鏈 DNA，此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數量為

（以上過程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內DNA復制的原理，進行生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題：

（1）PCR反應的基本步驟是變性、復性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結構如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止。現主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應的緩沖液等物質外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學家研究發(fā)現DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體DNA的復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內染色體DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測序技術的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應。在四個含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復制隨機終止，產生四組不同長度的一系列終止處帶有標記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質）上進行電泳和放射自顯影后，可以根據電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過程橫線①中應該加入的物質是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進行電泳……”，請解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結果如圖2所示，請寫出待測DNA分子的序列

。
（4）某同學要通過PCR技術獲得被³²P標記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應管中已經有模板、引物、酶和相應緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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