酵母細胞基因轉錄需要轉錄因子，轉錄因子包括DNA結合功能域（DNA-BD）和轉錄激活結構域（DNA-AD），兩結構域分開時不能激活轉錄。如果將待測蛋白質X與DNA-BD融合，蛋白質Y與DNA-AD融合，蛋白質X和Y有相互作用時，兩結構域能重新呈現(xiàn)完整轉錄因子活性，并可激活報告基因的轉錄，過程如圖1所示。已知報告基因LacZ表達的酶可以將無色化合物X-gal水解成藍色產物。研究人員為了驗證蛋白質X和Y是否具有相互作用，分別構建不同的酵母表達載體（如圖2和圖3所示），其中Ampr為氨芐青霉素（抑制細菌細胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPⅠ分別為控制組氨酸和色氨酸合成的基因。請回答下列問題：
（1）研究小組采用了巢式PCR技術獲取蛋白質X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術原理是利用兩套PCR引物進行兩輪PCR擴增（如圖4所示），首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進行15～30個循環(huán)的擴增；第二輪擴增以第一輪擴增產物為模板，利用第二對引物（內引物或巢式引物）進行15～30個循環(huán)擴增。相比于常規(guī)PCR獲得的產物而言，巢式PCR獲得的產物特異性 強強（“強”或“弱”），原因是 如果利用外引物擴增產生了錯誤片段，再利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低如果利用外引物擴增產生了錯誤片段，再利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低。
（2）研究人員的主要技術路線如表所示，請完善下表：
| 實驗目的 | 方法步驟要點（部分） |
| 獲取X和Y基因的編碼區(qū)序列 | 巢式PCR擴增蛋白質Y編碼區(qū)序列時需在兩個① 內 內 （填寫“內”、“外”或“內和外”）引物的5?端分別添加序列②GAATTC 和 CTCGAG GAATTC 和 CTCGAG ；為驗證目的基因在PCR擴增時是否發(fā)生了基因突變，可對PCR產物進行③DNA 測序（測序） DNA 測序（測序） 。 |
| pLexA-JL和pB42AD載體的構建 | 用特定限制酶切割目的基因和載體并連接，連接產物導入大腸桿菌后擴增；為確定質粒構建是否成功，需要抽提兩種質粒并酶切， 電泳后觀察④ 是否出現(xiàn)預期大小的目標條帶 是否出現(xiàn)預期大小的目標條帶 。 |
| 轉化酵母細胞 | 將成功構建的載體通過⑤ Ca2+處理（感受態(tài)細胞） Ca2+處理（感受態(tài)細胞） 法導入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌中，培養(yǎng)基中需添加物質有⑥def def （用下列字母填寫）。a.氨芐青霉素 b.色氨酸 c.亮氨酸 d.X-gal e.瓊脂 f.甲硫氨酸 |
| 實驗驗證 | 通過觀察培養(yǎng)基中⑦ 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍色） 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍色） 來驗證蛋白質X和Y是否具有相互作用。 |
AD
AD
。A.在細胞體內檢測抗原和抗體能否發(fā)生相互作用
B.判斷控制某一性狀的兩對基因是否能夠獨立遺傳
C.判斷RNA聚合酶與某啟動子的結合是否具有組織特異性
D.篩選宿主細胞上能與新冠病毒S刺突蛋白特異性結合的受體
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；遺傳信息的轉錄和翻譯．
【答案】強；如果利用外引物擴增產生了錯誤片段，再利用內引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率低；內；GAATTC 和 CTCGAG；DNA 測序（測序）；是否出現(xiàn)預期大小的目標條帶；Ca2+處理（感受態(tài)細胞）；def；菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍色）；AD
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：29難度：0.6
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）?？衫枚c突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為?？蒲腥藛T通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克?。?，可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：4引用：3難度：0.7
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